沙蔥黃酮提取工藝優(yōu)化、結(jié)構(gòu)鑒定及其相關(guān)生物活性研究.pdf

1、沙蔥廣泛生長(zhǎng)于我國西北荒漠化草原且所含營養(yǎng)物質(zhì)豐富，且所含有營養(yǎng)物質(zhì)豐富，擁有其獨(dú)特的天然生物活性。而沙蔥黃酮作為其天然活性成分之一，目前與其相關(guān)的研究報(bào)道較少。為使沙蔥活性成分能夠得到全面的研究與開發(fā)，本研究旨在建立一套得率較高、活性較好的沙蔥黃酮提取工藝、并結(jié)合相關(guān)試驗(yàn)確定其抗氧化、抗菌活性及對(duì)綿羊外周血淋巴細(xì)胞免疫功能的影響作用，為沙蔥有效成分的進(jìn)一步研究和沙蔥相關(guān)保健產(chǎn)品及飼料添加劑的開發(fā)與利用提供依據(jù)。本試驗(yàn)所得結(jié)果如下:

2、r>　　(1)在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面法對(duì)超聲波和酶解法提取沙蔥總黃酮的工藝進(jìn)行優(yōu)化，得出超聲波法提取沙蔥總黃酮的最佳提取工藝參數(shù)為:提取時(shí)間15min，提取溫度40℃，乙醇濃度75％，料液比1∶30g/mL，此條件下沙蔥總黃酮得率為12.85±0.03mg/g。纖維素酶解法提取沙蔥總黃酮的最佳提取工藝參數(shù)為:0.1g脫脂脫色沙蔥粉末中添加4.5mg纖維素酶，溫度39℃，體系pH值為4.3，乙醇濃度為75％，料液比1∶50g/mL

3、，提取時(shí)間4h，此條件下沙蔥總黃酮得率為5.48±0.02mg/g。
　　(2)比較兩種方法提取所得沙蔥總黃酮的體外抗氧化、抗菌及對(duì)綿羊外周血淋巴細(xì)胞免疫功能的影響作用。結(jié)果顯示，沙蔥總黃酮具有一定的體外抗氧化活性，相同濃度條件下超聲法提取所得沙蔥總黃酮的總還原能力及體外清除DPPH有機(jī)自由基的能力強(qiáng)于酶解法提取所得沙蔥總黃酮，酶解法所得沙蔥總黃酮清除羥基自由基的能力高于超聲波提取法所得沙蔥總黃酮。沙蔥總黃酮對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄

4、球菌的抑制作用不敏感，對(duì)沙門氏菌的抑制作用為低度敏感，對(duì)綠膿桿菌沒有抑制作用，并且兩種提取方法所得沙蔥總黃酮的抑菌作用無明顯差別。兩種提取方法所得沙蔥總黃酮均能夠促進(jìn)綿羊外周血淋巴細(xì)胞增殖，上調(diào)綿羊外周血淋巴細(xì)胞IL-2與IFN-γ基因的mRNA表達(dá)水平，下調(diào)IL-4基因mRNA的表達(dá)水平，且超聲法提取所得沙蔥總黃酮效果優(yōu)于酶解法提取所得沙蔥總黃酮。
　　(3)對(duì)超聲波提取所得沙蔥總黃酮使用聚酰胺柱層析進(jìn)行梯度洗脫，分別得到蒸餾水

5、、35％、55％、75％乙醇洗脫組分，并分別對(duì)各組分進(jìn)行紅外、紫外光譜檢測(cè)及液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)。綜合三種檢測(cè)結(jié)果分析得出，蒸餾水洗脫成分含有大量的單糖，35％乙醇洗脫組分除含有單糖外可能含有3'，4'-環(huán)氧基-7-O-5-甲氧基黃酮醇與7-O-5，4'-二甲氧基-3'-羥基黃酮，55％乙醇洗脫組分中含有糖類、蘆丁、木犀草素-5'-O-葡萄糖-4-羥基苯丙酸、異槲皮苷。75％乙醇洗脫組分中含有糖類、金合歡素及黃酮類物質(zhì)。
　　(4)對(duì)沙蔥

6、總黃酮不同洗脫組分的體外抗氧化、抗菌及對(duì)綿羊外周血淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用進(jìn)行研究。結(jié)果顯示沙蔥總黃酮中35％乙醇洗脫組的抗氧化與免疫調(diào)節(jié)活性最強(qiáng)，其所含的3'，4'-環(huán)氧基-7-O-5-甲氧基黃酮醇與7-O-5，4'-二甲氧基-3'-羥基黃酮的活性結(jié)構(gòu)是其抗氧化活性的關(guān)鍵基團(tuán)，而其所含的C2=C3雙鍵結(jié)構(gòu)是其調(diào)節(jié)免疫活性的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)組分。而在沙蔥總黃酮中起到抗菌活性的關(guān)鍵部位是55％乙醇洗脫組成分，這不僅與其結(jié)構(gòu)組分中含有電荷密度較高的C