沙蔥多糖的分離、純化和結(jié)構(gòu)鑒定及其生物學(xué)活性的研究.pdf

1、沙蔥(Allium mongolicum Regel)是內(nèi)蒙古草原生長(zhǎng)量大且為羊喜食的牧草。天然植物多糖具有抗菌、抗病毒、增強(qiáng)免疫力和促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)等作用，是確保飼料和動(dòng)物性食品安全以及人體健康的理想添加劑。論文通過(guò)四部分內(nèi)容研究了沙蔥多糖的提取、純化和結(jié)構(gòu)，結(jié)合體內(nèi)和體外試驗(yàn)對(duì)沙蔥多糖的生物學(xué)活性進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，并從分子水平初步探討了其免疫調(diào)節(jié)機(jī)制。為開(kāi)發(fā)沙蔥資源和綠色、安全的動(dòng)物免疫佐劑或飼料添加劑提供理論和科學(xué)依據(jù)。
　

2、　 第一部分沙蔥多糖的提取、純化和結(jié)構(gòu)鑒定。
　　 采用熱水浸提法提取了沙蔥多糖，優(yōu)化了沙蔥多糖活性炭脫色的工藝。研究了活性炭添加量、脫色時(shí)間和脫色溫度對(duì)沙蔥多糖脫色效果的影響，通過(guò)正交試驗(yàn)確定了沙蔥多糖活性炭脫色的最佳工藝參數(shù)，即脫色溫度80℃，活性炭添加量1.0％，吸附時(shí)間40min，在此條件下，脫色率為93.25％，多糖損失率為18.79％。
　　 對(duì)脫色后的沙蔥多糖進(jìn)行SephadexG-100柱層析純化并測(cè)定

3、其分子量，采用紫外光譜、紙層析、比旋光度法和凝膠柱層析法檢驗(yàn)純度；硅膠薄層層析(TLC)、高效液相色譜(HPLC)鑒定單糖組成，紅外光譜(IR)和核磁共振(NMR)進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析。結(jié)果表明，純化后的沙蔥多糖(SCSP)是一種白色疏松、易溶于水、分子量為5.89x10~4D的均一組分中性多糖，是由L-Rha、D-Glc、D-Gal三種吡喃糖構(gòu)成的雜多糖，糖鏈的主要連接方式為α-Glc(1→4)、[α-Glc(1→)4)-]n和端基α-Rha

4、。
　　 第二部分SCSP的體外抑菌試驗(yàn)。
　　 采用瓊脂擴(kuò)散法比較了沙蔥多糖(SCSP)、沙蔥鮮汁及黃芪多糖(HQSP)在體外對(duì)大腸桿菌、痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、假單胞綠膿桿菌、變形桿菌的抑菌作用。結(jié)果表明，20 mg/mL和40 mg／mL的SCSP對(duì)以上6種細(xì)菌均有一定的抑制作用，尤其對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果較為明顯，最大抑菌圈直徑分別為13.3mm、9.9mm；HQSP對(duì)以上細(xì)菌均無(wú)任

5、何抑制作用；沙蔥鮮汁的抑菌效果更為顯著，對(duì)6種細(xì)菌均有較強(qiáng)的抑制作用，抑菌圈直徑均≥8mm，尤其對(duì)腸道細(xì)菌痢疾桿菌的抑菌效果最為顯著，最大抑菌圈直徑為21.2mm。
　　 第三部分 SCSP的抗腫瘤作用。
　　 體外采用MTT法，研究了不同濃度的SCSP對(duì)S180、L1210、YAC-1、K562和A5495種細(xì)胞株的抑制作用；通過(guò)體內(nèi)飼養(yǎng)試驗(yàn)研究了SCSP對(duì)S180腹水瘤小鼠腫瘤的抑制作用和免疫調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明，SC

6、SP高、中劑量組對(duì)S180、YAC-1、K562細(xì)胞株均有顯著抑制作用(P<0.05)，SCSP各劑量組對(duì)L1210和A549細(xì)胞株無(wú)顯著抑制作用(P>0.05)；高、中、低三個(gè)劑量組的SCSP均能夠改善S180腹水瘤小鼠的生存狀態(tài)，提高其生存質(zhì)量，抑制腹水的形成，延長(zhǎng)存活期，此外，還可以提高小鼠的胸腺、脾臟指數(shù)及血清IL-2、TNF-α和IFN-γ的含量，尤其以高劑量組的作用效果最為顯著(P<0.05)。
　　 第四部分 SC

7、SP對(duì)正常小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用及機(jī)理。
　　 研究飼喂SCSP對(duì)正常小鼠各項(xiàng)免疫指標(biāo)和免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞因子及基因表達(dá)的影響。結(jié)果表明，1.25 mg/mL的SCSP能顯著提高正常小鼠的免疫器官指數(shù)(P<0.05)，12.5 mg／mL的SCSP可顯著提高小鼠血清IgM、IgG的含量(P<0.05)；100～200 μg／mL的SCSP作用72 h，能顯著促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖(P<0.05)，50～150 μg／mL的SCSP作

8、用72 h，可顯著增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能(P<0.05)，50～200 μg／mL的SCSP能顯著提高小鼠NK細(xì)胞對(duì)YAC-1的殺傷作用(P<0.05)，但SCSP各劑量組對(duì)正常小鼠骨髓細(xì)胞和胸腺淋巴細(xì)胞的增殖無(wú)顯著影響(P>0.05)；100、150μg/mL的SCSP能顯著增強(qiáng)ConA對(duì)正常小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2的誘導(dǎo)作用及LPS對(duì)正常小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α的誘導(dǎo)作用(P<0.05)；經(jīng)RT-PCR技術(shù)分析，這兩