荷葉黃酮的提取、純化、結(jié)構(gòu)鑒定及其生物活性研究.pdf

1、本文以荷葉為原料，研究了荷葉中總黃酮化合物的提取與純化工藝。運(yùn)用化學(xué)分析、色譜、光譜及質(zhì)譜等儀器分析技術(shù)和方法，對(duì)荷葉中黃酮化合物的結(jié)構(gòu)及其生物活性進(jìn)行了初步研究。主要研究結(jié)果如下： 1.荷葉黃酮提取工藝條件的優(yōu)化本試驗(yàn)考察了提取液、濃度、時(shí)間、溫度和料液比五個(gè)單因素對(duì)荷葉總黃酮提取率的影響，采用三元二次旋轉(zhuǎn)正交組合設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn)，建立了提取溫度、提取時(shí)間、提取料液比提取工藝參數(shù)間的數(shù)學(xué)模型，方程為Y=67.03+2.68x1+0

2、.16x2+2.94x3-2.06x1x2-0.43x1x3+0.41X2X3-4.74x12-4.33x22-4.93x32，經(jīng)計(jì)算機(jī)模擬尋優(yōu)確定了用Tween80助提的最佳工藝條件：提取液為1％Tween80，浸提溫度74.8～76.5℃、浸提時(shí)間38～43min、料液比1:25～1:28?？傻米罡咛崛÷蕿?9.5％。 2.荷葉黃酮純化方法的研究比較5種大孔吸附樹脂對(duì)荷葉黃酮靜態(tài)吸附和解吸附能力，并對(duì)XAD16型樹脂的動(dòng)態(tài)吸

3、附特性進(jìn)行了研究。XAD16型樹脂最佳純化工藝參數(shù)為：上樣液濃度1.1mg/mL，流速為1BV/h時(shí)，洗脫劑為50％的乙醇溶液，流速為2BV/h進(jìn)行洗脫，洗脫峰對(duì)稱性好。采用重結(jié)晶的方法進(jìn)一步純化荷葉黃酮，其純度達(dá)92％。 3.荷葉黃酮的結(jié)構(gòu)初步研究采用紫外、紅外、質(zhì)譜、高效液相色譜、氣相色譜等分析手段，對(duì)荷葉黃酮化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，推測(cè)該化合物結(jié)構(gòu)為異鼠李素-3-O-葡萄糖苷。 4.荷葉黃酮生物活性研究(1)荷葉黃酮體

4、外抗氧化活性研究分別運(yùn)用鄰苯三酚一魯米諾、CuSO4-Phen-VC-H2O2和雙氧水-魯米諾化學(xué)發(fā)光體系測(cè)定了荷葉黃酮對(duì)超氧陰離子、體外雙氧水、羥基自由基的清除作用，采用CuSO4-Phen-VC-H2O2-DNA體系測(cè)定了荷葉黃酮對(duì)體外DNA損傷的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明荷葉黃酮具有較好的體外清除活性氧和DNA損傷的保護(hù)作用。 采用比色法檢測(cè)了荷葉黃酮對(duì)動(dòng)物組織體外抗氧化作用的影響，結(jié)果表明荷葉黃酮能夠有效地清除羥自由基，抑制

5、由羥自由基引起的脂質(zhì)過氧化、保護(hù)生物膜，減少紅細(xì)胞溶血，減輕肝線粒體腫脹程度，提示具有很強(qiáng)的抗氧化能力。 (2)荷葉黃酮對(duì)胰脂肪酶、α-靛粉酶活性的影響研究了荷葉黃酮的濃度、作用時(shí)間、酶劑量等對(duì)豬胰脂肪酶、α-粉酶活性的影響。結(jié)果表明：(a)荷葉黃酮抑制豬胰脂肪酶活性是通過間接改變底物乳化來阻礙底物.酶結(jié)合達(dá)到抑制作用，呈非競(jìng)爭(zhēng)性抑制；(b)荷葉黃酮對(duì)α-淀粉酶活性有抑制作用，且荷葉黃酮粗提物對(duì)淀粉酶活性抑制作用大于精制黃酮，提