乙醇對(duì)大鼠大腦神經(jīng)細(xì)胞ERK1-2磷酸化改變研究.pdf

1、研究背景和目的:
　　 乙醇是脂溶性溶劑,可快速通過(guò)血液進(jìn)入大腦,與大腦神經(jīng)細(xì)胞作用,進(jìn)而產(chǎn)生直接毒性作用。乙醇能引起神經(jīng)系統(tǒng)的損傷,并隨著血液中乙醇濃度的升高,人的注意力、判斷力及辨別力均會(huì)不同程度下降,進(jìn)而可能引發(fā)各種刑事案件和民事案件。近年來(lái),隨著含有乙醇的飲品不斷進(jìn)入人們的生活當(dāng)中,由此而引發(fā)的各種民事和刑事案件以及交通事故也呈上升趨勢(shì)。因此很有必要對(duì)乙醇與機(jī)體的作用機(jī)制進(jìn)行深入的研究。本研究通過(guò)乙醇中毒后大鼠大腦神經(jīng)細(xì)

2、胞內(nèi)的細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated proteinkinases,ERK)的磷酸化水平的變化,研究乙醇對(duì)MAPKs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用來(lái)研究乙醇對(duì)大鼠大腦神經(jīng)細(xì)胞的損傷作用,并通過(guò)觀察其與形態(tài)學(xué)的改變的聯(lián)系,為研究乙醇對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的損傷機(jī)理提供參考依據(jù)。
　　 研究方法:
　　 1、分別按4ml/kg、8ml/kg、16ml/kg的乙醇體重比對(duì)大鼠進(jìn)行灌胃,制作低、中、高劑量急性乙醇中毒

3、模型,對(duì)照組給予相應(yīng)體積的生理鹽水。
　　 2、采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)不同劑量乙醇作用下大鼠腦神經(jīng)細(xì)胞中p-ERK1/2表達(dá)的改變。
　　 3、采用Western-blot蛋白印跡檢測(cè)大鼠大腦皮質(zhì)、海馬、中腦的p-ERK1/2表達(dá)量的改變。
　　 4、統(tǒng)計(jì)分析:免疫組織化學(xué)數(shù)據(jù)均用-x±s表示,用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析,采用LSD法進(jìn)行兩兩比較,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。用ImageJ圖像

4、分析處理系統(tǒng)進(jìn)行Western-blot結(jié)果分析,測(cè)定目標(biāo)條帶灰度值。
　　 結(jié)果:
　　 1、大鼠腦組織HE染色結(jié)果:對(duì)照組與低劑量組大鼠腦組織未見(jiàn)病理學(xué)改變:中劑量組4h、8h腦實(shí)質(zhì)內(nèi)見(jiàn)輕度的血管擴(kuò)張、充血,小血管周圍腔隙增寬等病理改變:高劑量組2h、4h、8h腦實(shí)質(zhì)見(jiàn)明顯的血管擴(kuò)張、充血,小血管周圍腔隙增寬,個(gè)別區(qū)域內(nèi)可見(jiàn)散在的紅細(xì)胞。
　　 2、大鼠腦組織免疫組化結(jié)果:免疫組化結(jié)果顯示軀體感覺(jué)中樞、聽(tīng)覺(jué)中

5、樞、海馬、丘腦內(nèi)側(cè)背核、下丘腦、杏仁體等區(qū)域有明顯的變化,其他區(qū)域變化較小不明顯,不作統(tǒng)計(jì)。對(duì)照組大鼠大腦皮質(zhì)、海馬區(qū)域神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)p-ERK1/2只有輕度表達(dá);低劑量組大鼠皮質(zhì)、海馬區(qū)域乙醇作用后大腦神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)p-ERK1/2表達(dá)均有所增加,皮質(zhì)區(qū)域在1h、2h、4h時(shí)與對(duì)照組比較有意義(P＜0.05),海馬區(qū)域在2h、4h時(shí)與對(duì)照組比較有意義(P＜0.05);中劑量組大鼠在乙醇作用后,大腦皮質(zhì)、海馬區(qū)域在1h、2h、4h、8h時(shí)與對(duì)照

6、組比較有意義(P＜0.05),皮質(zhì)、海馬在2h時(shí)與低劑量比較有意義(P＜0.05);高劑量組大鼠在乙醇作用后,皮質(zhì)區(qū)域在1h、2h、4h、8h、12h時(shí)與對(duì)照組比較有意義(P＜0.05),海馬區(qū)域在1h、2h、4h、8h時(shí)與對(duì)照組比較有意義(P＜0.05),在1h、2h、4h時(shí)與中劑量組比較都有意義(P＜0.05);在丘腦內(nèi)側(cè)背核區(qū)域p-ERK1/2表達(dá)增強(qiáng),低劑量組在乙醇作用后大腦神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)p-ERK1/2表達(dá)有所增加,在2h時(shí)與對(duì)照

7、組比較有意義(P＜0.05);中劑量組大鼠在乙醇作用后,在1h、2h、4h時(shí)與對(duì)照組比較有意義(P＜0.05),在2h時(shí)與低劑量組比較有意義;高劑量組大鼠在乙醇作用后,在1h、2h、4h、8h時(shí)與對(duì)照組比較有意義(P＜0.05),在1h、2h與中劑量劑量組比較有意義:在杏仁體區(qū)域p-ERK1/2表達(dá)比較明顯,低劑量組在乙醇作用后大腦神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)p-ERK1/2表達(dá)有所增加,在2h時(shí)與對(duì)照組比較有意義(P＜0.05):中劑量組大鼠在乙醇作用

8、后,在1h、2h、4h、8h時(shí)與對(duì)照組比較有意義(P＜0.05),在1h、2h、4h時(shí)與低劑量組比較有意義;高劑量組大鼠在乙醇作用后,在1h、2h、4h、8h、12h時(shí)與對(duì)照組比較有意義(P＜0.05),在2h與中劑量劑量組比較有意義(P＜0.05)。
　　 3、乙醇作用后的大鼠大腦皮質(zhì)ERKl的表達(dá)水平?jīng)]有明顯的變化,在24小時(shí)內(nèi)幾乎不改變總量。皮質(zhì)p-ERK1/2表達(dá)水平,在高劑量組在1h、2h、4h與對(duì)照比較有意義,在2h