慢性乙醇暴露小鼠腦神經(jīng)細(xì)胞IP3R1表達(dá)變化的研究.pdf

1、目的：據(jù)報道世界衛(wèi)生組織估計全世界有20多億人飲用酒精性飲料及7.63億人診斷為酒精性相關(guān)性疾病、紊亂癥。有報道顯示慢性乙醇中毒能產(chǎn)生永久的認(rèn)知功能障礙而被認(rèn)為是繼阿爾茨海默病（AD）后引起的癡呆的第二大原因。慢性乙醇中毒具體機制還不明確，但有研究表明，慢性酒精中毒的發(fā)病機制與細(xì)胞凋亡有關(guān)。caspase-3被認(rèn)為是凋亡的執(zhí)行者，乙醇暴露可引起大鼠、小鼠腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡，caspase-3活性增強，表達(dá)增加，而caspase-3的激活與細(xì)

2、胞內(nèi)Ca+濃度的增加有關(guān)聯(lián)。1，4，5-三磷酸肌醇受體(IP3R)是細(xì)胞內(nèi)主要存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的Ca2+釋放通道，它與肌醇三磷酸(IP3)特異性結(jié)合后，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)Ca+迅速釋放。乙醇能誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)Ca+濃度升高，研究顯示乙醇增加胞內(nèi)Ca+濃度可能來源于鈣庫釋放，而胞漿Ca+濃度升高誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。本研究在建立小鼠慢性乙醇暴露的動物模型基礎(chǔ)上，應(yīng)用免疫組化和Western blot技術(shù)檢測慢性乙醇暴露小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞IP3R1的表達(dá)變化，探討慢

3、性乙醇暴露小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞損傷的細(xì)胞凋亡機制。
　　 實驗材料與方法：
　　 一、動物模型的建立及分組
　　 健康成年（8周齡）清潔級昆明系雄性小鼠40只，體重30～42g，由中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。適應(yīng)性喂養(yǎng)5天后給予飲用礦泉水和不同濃度乙醇液體。隨機分為90d正常對照組、10％、20％、30％乙醇實驗組和180d正常對照組、10％、20％、30％乙醇實驗組，每組5只動物。每日觀察各組動物喂養(yǎng)情況及行

4、為變化，每周測體重一次。至實驗預(yù)計時間，乙醚吸入麻醉過量后迅速斷頭，剝離顱頂、枕部皮膚、肌肉和頂骨、枕骨，取出完整腦組織。
　　 二、實驗方法
　　 應(yīng)用免疫組化、Western blot等方法檢查慢性乙醇暴露后小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞IP3R1表達(dá)的變化。免疫組化結(jié)果應(yīng)用Motic Image Advanced3.2圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析，以正常對照組小鼠大腦皮質(zhì)作對照，顯微鏡×400倍下，在大腦皮質(zhì)區(qū)隨機選取10個視野，計

5、數(shù)細(xì)胞總數(shù)、陽性細(xì)胞數(shù)及計算陽性細(xì)胞率。Western blot結(jié)果檢測各組平均積分光密度值。用SPSS13.0 for Windows軟件對組間實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析。
　　 結(jié)果：
　　 慢性乙醇暴露小鼠毛發(fā)失去光澤、雜亂、稀疏，精神萎靡、易激惹，體重增長緩慢，大腦質(zhì)軟，組織腫脹，腦溝變淺，H.E.染色顯示皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞嗜伊紅染色增強，軸突腫脹，尼氏體邊聚，腦實質(zhì)內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞、血管周間隙增寬，有的神經(jīng)細(xì)胞核深染，染色

6、質(zhì)固縮，胞質(zhì)濃縮，可見噬神經(jīng)細(xì)胞現(xiàn)象。正常IP3R1免疫組化染色物分布于神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)。90d各實驗組，隨著乙醇濃度的增加，IP3R1免疫組化陽性細(xì)胞數(shù)和陽性細(xì)胞率逐步增加，組間比較，差異顯著(P＜0.05);180d10％、20％乙醇實驗組陽性細(xì)胞數(shù)和陽性細(xì)胞率逐步增加，組間比較，差異顯著(P＜0.05);而30％乙醇實驗組陽性細(xì)胞數(shù)和陽性細(xì)胞率反而減少，且低于相同濃度90d實驗組(P＜0.05)。Western blot與免疫組化檢

7、查結(jié)果基本一致。
　　 結(jié)論：
　　 1、慢性乙醇暴露導(dǎo)致小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞IP3R1表達(dá)增強。
　　 2、慢性乙醇暴露導(dǎo)致小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞IP3R1表達(dá)增強的程度與飲酒時間及飲酒濃度相關(guān)，乙醇濃度越高，IP3R1表達(dá)的越多。但隨著時間的延長，高濃度乙醇暴露IP3R1表達(dá)量反而有所減少，可能與神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死、數(shù)目減少有關(guān)。
　　 3、乙醇引起的細(xì)胞凋亡可能與乙醇誘導(dǎo)的IP3R1表達(dá)增強有關(guān)。