小鼠慢性酒精中毒腦神經(jīng)細(xì)胞APP和Aβ蛋白的表達(dá).pdf

1、我國(guó)是一個(gè)人口大國(guó)，而且是一個(gè)老齡化進(jìn)程最快、老齡人口眾多的國(guó)家。我國(guó)又是一個(gè)具有悠久歷史、多種多樣酒文化并存的國(guó)家。由于特殊的社會(huì)和歷史原因，酒精中毒的情況經(jīng)常發(fā)生。 慢性酒精中毒(chronic alcoholism)是以對(duì)乙醇的成癮為特征，由于經(jīng)常反復(fù)飲酒對(duì)乙醇產(chǎn)生耐受，當(dāng)其戒酒時(shí)出現(xiàn)脫癮(withdrawal)的神經(jīng)癥候。慢性酒精中毒引起神經(jīng)系統(tǒng)及其他器官的嚴(yán)重?fù)p害，其中神經(jīng)系統(tǒng)的損害最為嚴(yán)重。在法醫(yī)學(xué)實(shí)踐中，有時(shí)會(huì)遇到

2、酒精中毒的案例，常與交通事故、重要器官組織功能障礙等有關(guān)。 阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一種漸進(jìn)性的神經(jīng)變性性疾病，表現(xiàn)為全面的認(rèn)知功能障礙。主要病理學(xué)改變是由來(lái)源于淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protein，APP)的β-淀粉樣肽(beta-amyloid，Aβ)構(gòu)成的淀粉樣斑塊和過(guò)度或異常磷酸化的Tau蛋白構(gòu)成的神經(jīng)纖維纏結(jié)。 阿爾茨海默病的發(fā)病受很多因素影響

3、，包括環(huán)境因素、不良飲食習(xí)慣、藥物種類、中毒等。慢性酒精中毒是否會(huì)導(dǎo)致腦內(nèi)APP和Aβ蛋白的增多從而引發(fā)阿爾茨海默病的發(fā)生，目前尚缺乏系統(tǒng)的理論和實(shí)驗(yàn)研究。 神經(jīng)細(xì)胞特異性烯醇化酶(Neuron-specific enolase，NSE)是神經(jīng)細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白，特異性的存在于神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞中，占腦內(nèi)全部可溶性蛋白的1.5％，神經(jīng)元損傷或壞死后NSE進(jìn)入血液。 本研究在建立小鼠慢性酒精中毒的動(dòng)物模型基礎(chǔ)上，應(yīng)用組織

4、病理學(xué)和免疫組織化學(xué)等技術(shù)，研究小鼠慢性酒精中毒后，腦組織神經(jīng)細(xì)胞中APP和Aβ的表達(dá)，并應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)觀察到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，探討慢性酒精中毒腦神經(jīng)細(xì)胞中APP和Aβ的含量變化以及與阿爾茨海默病發(fā)病之間的因果關(guān)系。 材料和方法： 一、動(dòng)物模型的建立及分組 雄性健康9周齡昆明小鼠42只，隨機(jī)分為30天組，60天組，每組又分10％酒精組、20％酒精組和對(duì)照組，其中對(duì)照組各5只，10％酒精組各8只，2

5、0％酒精組各8只。 實(shí)驗(yàn)組將無(wú)水乙醇(色譜純)用飲用礦泉水配成濃度為10％、20％酒精溶液作為實(shí)驗(yàn)小鼠飲用水，對(duì)照組采用飲用礦泉水代替。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，直接斷頭處死動(dòng)物，迅速提取小鼠腦組織，4％多聚甲醛/PBS pH7.4固定液固定，石蠟包埋、制片。 二、實(shí)驗(yàn)方法 (1)應(yīng)用HE染色法觀察小鼠慢性酒精中毒后腦神經(jīng)細(xì)胞的病理組織學(xué)形態(tài)變化； (2)應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法觀察小鼠慢性酒精中毒后腦神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)元特

6、異性烯醇化酶表達(dá)的變化； (3)應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法觀察小鼠慢性酒精中毒后腦神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)APP和Aβ表達(dá)情況； (4)采用Motic Images Advanced3.2圖像分析系統(tǒng)計(jì)算免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞內(nèi)陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物的光密度； (5)應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： (1)各實(shí)驗(yàn)組小鼠出現(xiàn)明顯的慢性中毒表現(xiàn)，且體重明顯下降； (2) HE染色見(jiàn)慢性

7、酒精中毒的小鼠腦組織水腫，神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)尼氏體消失或邊聚，神經(jīng)細(xì)胞周圍間隙增寬； (3)神經(jīng)元特異性烯醇化酶免疫組織化學(xué)染色見(jiàn)該酶蛋白含量增加； (4)對(duì)照組可見(jiàn)少量APP免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性的神經(jīng)細(xì)胞，染色產(chǎn)物分布于細(xì)胞胞漿內(nèi)，呈棕黃色。實(shí)驗(yàn)組APP染色陽(yáng)性細(xì)胞明顯增多，表達(dá)增強(qiáng)，且不同濃度不同時(shí)間段陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度不同。實(shí)驗(yàn)組腦神經(jīng)細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)明顯的Aβ陽(yáng)性染色產(chǎn)物，且高濃度長(zhǎng)時(shí)間給藥組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增多，表達(dá)增強(qiáng)。使用M

8、otic Image Advanced3.2圖像分析系統(tǒng)計(jì)算各組平均積分光密度，并采用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組間有明顯差異。 結(jié)論： 1.慢性酒精中毒可引起實(shí)驗(yàn)小鼠腦神經(jīng)細(xì)胞呈退行性改變； 2.慢性酒精中毒可引起實(shí)驗(yàn)小鼠腦神經(jīng)細(xì)胞神經(jīng)元特異性烯醇化酶含量增多和分布異常； 3.慢性酒精中毒可引起實(shí)驗(yàn)小鼠腦神經(jīng)細(xì)胞胞漿內(nèi)產(chǎn)生Aβ蛋白，且APP蛋白的表達(dá)明顯增強(qiáng)。 4.慢性酒精中毒可