胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-2對U251細胞增殖和ERK1-2磷酸化及核轉(zhuǎn)移的促進作用.pdf

1、前言: 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-2(IGFBP-2)是胰島素樣生長因子(IGF)系統(tǒng)的成員之一，由于其在全身多系統(tǒng)的多種惡性腫瘤中表達明顯增高，近些年來倍受學術(shù)界的矚目。研究顯示，其可能是一種獨立的生長調(diào)節(jié)因子，通過多種途徑調(diào)節(jié)細胞的增殖和侵襲。DNA微陣列和組織芯片技術(shù)證實，IGFBP-2在多形性膠質(zhì)母細胞瘤(GBM)中過表達，IGFBP-2的表達水平與膠質(zhì)瘤的惡性程度成正相關(guān)，提示IGFBP-2在膠質(zhì)瘤的惡性進展中發(fā)揮了重

2、要作用，而其在GBM發(fā)生、發(fā)展中所起的作用尚未十分明確。細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK1/2)是一組絲/蘇氨酸蛋白激酶，能夠被細胞外的信號分子激活，繼而將細胞表面的信號轉(zhuǎn)導到細胞核內(nèi)，調(diào)節(jié)細胞的生長、凋亡和分化。多種胞外刺激可經(jīng)G蛋白偶聯(lián)受體、酪氨酸蛋白激酶受體或離子通道，經(jīng)Raf-MEK-ERK級聯(lián)信號激活ERK，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子(如Elk-1、ATF2、C Myc、STAT等)和一些激酶活性，促進細胞增殖、蛋白質(zhì)合成。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤

3、中，ERK1/2信號轉(zhuǎn)導通路能夠被多種生長因子和激素所激活。本實驗旨在探討IGFBP-2對GBM增殖的影響及可能通過的信號轉(zhuǎn)導通路。 實驗目的: 1、探討外源性IGFBP-2對人膠質(zhì)母細胞瘤細胞株U251細胞增殖的影響。 2、通過觀察外源性IGFBP-2對ERK1/2磷酸化及細胞內(nèi)定位的影響，探索IGFBP-2影響細胞增殖的信號轉(zhuǎn)導通路。 實驗方法: 1、通過四唑鹽(MTT)比色試驗及相差顯微鏡下

4、觀察，檢測不同濃度IGFBP-2對U251細胞增殖的影響2、用蛋白印記試驗檢測500ng/mlIGFBP-2作用不同時間對ERK1/2磷酸化的影響3、通過免疫熒光染色觀察500ng/mlIGFBP-2作用不同時間對磷酸化ERK1/2細胞內(nèi)轉(zhuǎn)位的影響。 實驗結(jié)果： 1、各濃度外源性IGFBP-2(125，250，500ng/ml)作用72小時促進U251細胞增殖，并且外源性IGFBP-2促進細胞增殖具有劑量依賴性，500n

5、g/mlIGFBP-2促增殖效果明顯強于125ng/ml及250ng/ml IGFBP-2，而125ng/ml IGFBP-2和250ng/ml IGFBP-2促增殖效果差別無統(tǒng)計學意義。 2、在U251細胞中，500ng/mlIGFBP-2作用5min,磷酸化ERK1/2增加近1倍，作用30min,磷酸化ERK1/2增加2倍以上。 3、免疫熒光染色顯示，IGFBP-2作用5分鐘后，磷酸化的ERK1/2顯著增多，500n

6、g/mlIGFBP-2作用30min磷酸化ERK1/2進一步增多并且發(fā)生核轉(zhuǎn)移。 結(jié)論： 研究表明，IGFBP-2促進了膠質(zhì)母細胞瘤U251細胞增殖，活化了ERK1/2，并且促進磷酸化ERK1/2細胞內(nèi)核轉(zhuǎn)位，提示了IGFBP-2在膠質(zhì)母細胞瘤中的絲裂原作用。根據(jù)這些發(fā)現(xiàn)，我們推測，IGFBP-2可能通過ERK信號通路促進膠質(zhì)母細胞瘤細胞增殖，從而維持膠質(zhì)母細胞瘤的惡性表形。研究同時提示，抑制IGFBP-2表達可能作為膠