胰島素樣生長因子-1對rbMP-2誘導下成纖維細胞增殖及成骨轉(zhuǎn)化的影響.pdf

1、目的:觀察胰島素樣生長因子-1(IGF—Ⅰ)在重組入骨形成蛋白2(rhBMP-2)誘導成纖維細胞(Fb)轉(zhuǎn)化為成骨細胞中的影響,探討IGF—Ⅰ對Fb在體外誘導成骨的過程中是否具有促進作用。
　　 方法:Fb來源于成年新西蘭大白兔(由山西醫(yī)科大學實驗動物中心提供)。分離、純化提取成纖維細胞,然后培養(yǎng)。將細胞分為:空白對照組、rhBMP-2干預組和IGF—Ⅰ+rhBMP-2干預組?？瞻讓φ战M:常規(guī)培養(yǎng)液培養(yǎng),不加入任何誘導劑及干預因

2、子；rhBMP-2干預組:常規(guī)培養(yǎng)液中加入100ng／ml的rhBMP-2；IGF—Ⅰ+rhBMP-2干預組:常規(guī)培養(yǎng)液中加入l00ng／ml的rhBMP-2與終濃度為50ng／ml的IGF-Ⅰ。定期在倒置顯微鏡下觀察Fb生長狀況,并采用四甲基偶氮唑藍(MTT)檢測細胞增殖情況,同時行堿性磷酸酶(ALP)活性檢測、茜素紅染色及鈣鈷染色評價其成骨分化的能力。
　　 結(jié)果:
　　 1.與其它兩組相比,IGF—Ⅰ+rhBMP-

3、2組細胞增殖速度快,周期短,MTT法檢測,細胞生長旺盛(P<0.05),而空白對照組與rhBMP-2干預組之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　 2.rhBMP-2干預組ALP表達高于空白對照組(P<0.01)；而IGF-Ⅰ+rhBMP-2組ALP表達明顯高于其它2組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　 3.茜素紅染色空白對照組未見明顯鈣化結(jié)節(jié),rhBMP-2干預組細胞可見紅色鈣化結(jié)節(jié),而IGF-Ⅰ+rhBMP-

4、2組鈣化結(jié)節(jié)數(shù)目明顯較成骨誘導對照組多,面積增大。
　　 4.鈣鈷染色:rhBMP-2干預組和IGF—Ⅰ+rhBMP-2干預組細胞胞漿中均可見淺棕色至棕黑色的細胞顆粒。但以IGF—Ⅰ+rhBMP-2干預組棕黑色顆粒較多?？瞻讓φ战M未見明顯陽性細胞。
　　 結(jié)論:
　　 1.Fb在體外一定條件下經(jīng)過誘導劑誘導后,可向成骨細胞方向轉(zhuǎn)化。
　　 2.IGF—Ⅰ可以促進Fb在rhBMP-2誘導下的增殖。