JAZF1基因表達(dá)上調(diào)對(duì)脂肪變性肝臟促炎因子的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分 JAZF1基因表達(dá)上調(diào)對(duì)飽和脂肪酸作用的肝細(xì)胞促炎因子產(chǎn)生的影響及其機(jī)制
　　目的:探討JAZF1表達(dá)上調(diào)對(duì)脂肪變性肝細(xì)胞促炎因子產(chǎn)生的影響及其可能的分子機(jī)制。
　　方法:通過利用一定濃度飽和脂肪酸作用大鼠源性正常肝細(xì)胞，構(gòu)建肝細(xì)胞脂肪變性模型;運(yùn)用JAZF1過表達(dá)腺病毒載體Ad-JAZF1上調(diào)肝細(xì)胞JAZF1表達(dá);利用甘油三酯氧化酶法檢測(cè)細(xì)胞甘油三酯含量;應(yīng)用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活率;通過RT-PCR檢測(cè)肝細(xì)胞J

2、AZF1及促炎因子TNF-α、MCP-1、IL-8的mRNA表達(dá)水平;采用ELISA檢測(cè)不同處理組肝細(xì)胞TNF-α、MCP-1及IL-8的蛋白分泌程度;通過利用western blot檢測(cè)P-JNK/JNK、P-P38 MAPK/P38 MAPK、P-ERK/ERK、IKBα、JAZF1及內(nèi)參β-actin的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:給予肝細(xì)胞不同濃度飽和脂肪酸作用不同時(shí)間，肝細(xì)胞促炎因子TNF-α、MCP-1及IL-8的表達(dá)和分

3、泌呈現(xiàn)濃度、時(shí)間依賴性升高(P＜0.01或P＜0.001);并且肝細(xì)胞P-JNK、P-P38 MAPK、P-ERK的磷酸化水平顯著增強(qiáng)， IKBα蛋白表達(dá)明顯降低(P＜0.05或P＜0.01);然而，飽和脂肪酸作用肝細(xì)胞的同時(shí)，分別給予細(xì)胞JNK、P38 MAPK、ERK及NF-κB通路特異性抑制劑之后，P-JNK、P-P38 MAPK、P-ERK的磷酸化水平降低，而IKBα蛋白表達(dá)明顯升高(P＜0.01或P＜0.001)，并且肝細(xì)胞T

4、NF-α、MCP-1及IL-8的表達(dá)顯著被抑制(P＜0.05或P＜0.01)。其次，利用Ad-JAZF1腺病毒感染飽和脂肪酸作用的肝細(xì)胞后，細(xì)胞的JAZF1mRNA及蛋白表達(dá)均明顯增高(P＜0.01或P＜0.001)，而TNF-α、MCP-1及IL-8的表達(dá)顯著降低(P＜0.05或P＜0.01)，并且P-JNK、P-P38MAPK、P-ERK的磷酸化水平降低（P＜0.05或P＜0.01），而IKBα蛋白表達(dá)沒有明顯變化。
　　結(jié)論

5、:飽和脂肪酸通過激活JNK、P38 MAPK、ERK及NF-κ B信號(hào)通路促進(jìn)促炎因子TNF-α、MCP-1及IL-8的表達(dá)，而JAZF1可能通過抑制飽和脂肪酸所誘導(dǎo)的JNK、P38 MAPK及NF-κ B信號(hào)通路的傳導(dǎo)，抑制促進(jìn)促炎因子TNF-α、MCP-1及IL-8的表達(dá)，從而緩解肝細(xì)胞脂肪變性的發(fā)生發(fā)展。
　　第二部分 JAZF1基因表達(dá)上調(diào)對(duì)高脂喂養(yǎng)小鼠肝臟促炎因子的調(diào)節(jié)及其可能的機(jī)制
　　目的:利用高脂喂養(yǎng)JAZF

6、1過表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠，初步探討JAZF1基因表達(dá)上調(diào)對(duì)高脂喂養(yǎng)小鼠肝臟促炎因子的調(diào)節(jié)及其可能的機(jī)制
　　方法:3周齡健康雄性野生C57BL/6J小鼠及JAZF1轉(zhuǎn)基因過表達(dá)(JAZF1-Tg)小鼠共40只，分別適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，完全隨機(jī)分為普食喂養(yǎng)野生小鼠組(NC組，n=10)，高脂喂養(yǎng)野生小鼠組(HF組，n=10)，普食喂養(yǎng)轉(zhuǎn)基因小鼠組(NJ組，n=10)和高脂喂養(yǎng)轉(zhuǎn)基因小鼠組(HJ組，n=10)，各組小鼠均喂養(yǎng)12周。定期檢測(cè)攝

7、食與體重，12周后，留取各組小鼠血漿與肝臟組織，測(cè)定空腹血糖(FBG)、血胰島素(INS)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游離脂肪酸(FFA)及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT);利用酶法檢測(cè)肝臟組織甘油三酯含量;利用RT-PCR檢測(cè)小鼠肝臟組織JAZF1及促炎因子TNF-α、MCP-1、IL-8的mRNA表達(dá)水平;利用Western blot檢測(cè)肝組織P-JNK/JNK、P-P38 MAPK/P38 MAPK、P-ERK/ERK、IKB

8、α、JAZF1及內(nèi)參β-actin的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:HF組及HJ組小鼠體重、血漿FBG、INS、TC、TG、FFA、ALT及肝臟甘油三酯含量均顯著高于NC組及NJ組(P＜0.01)，NJ組小鼠血漿TC低于NC組(P＜0.05）， HJ組小鼠血漿FBG、INS、TC及ALT水平均低于HF組(P＜0.05或P＜0.01)，而各組小鼠攝食無顯著性差異（P＞0.05）;HF組小鼠肝臟組織TNF-α、MCP-1、IL-8的mRNA

9、表達(dá)水平均顯著高于NC組(P＜0.05或P＜0.01)，HF組小鼠肝臟組織P-JNK、P-P38 MAPK、P-ERK的表達(dá)水平均明顯高于NC組（P＜0.05或P＜0.01），然而IKBα蛋白表達(dá)低于NC組（P＜0.05）;其次，與HF組小鼠相比，HJ組小鼠肝臟組織JAZF1 mRNA及蛋白表達(dá)均增高（P＜0.01），而TNF-僅、MCP-1及IL-8的表達(dá)顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），且P-JNK及P-P38 MAPK的表達(dá)