JAZF1在非酒精性脂肪肝形成與發(fā)展中的作用機(jī)制研究.pdf

1、第一部分 JAZF1抵抗老齡化誘導(dǎo)的NAFLD的形成
　　目的：探討JAZF1基因過表達(dá)在老齡化誘導(dǎo)的NAFLD形成中的作用。
　　方法：15只8周齡的JAZF1轉(zhuǎn)基因小鼠（ JAZF1-Tg鼠）和15只同年齡匹配的C57BL/6J小鼠（WT鼠）普食喂養(yǎng)3個(gè)時(shí)間段（3個(gè)月，6個(gè)月，12個(gè)月），每個(gè)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)抽取JAZF1-Tg和WT鼠各5只，檢測(cè)隨著年齡的增長各組小鼠的基礎(chǔ)生理代謝指標(biāo)以及肝臟中涉及脂肪酸從頭合成和氧化相關(guān)基

2、因的mRNA及蛋白水平。
　　結(jié)果：隨著年齡的增長，WT鼠肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯累積明顯增多（P<0.05）；與同齡的WT鼠比較，JAZF1-Tg鼠肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量明顯減少（P<0.05）；與同齡的WT鼠比較，喂養(yǎng)12個(gè)月后的JAZF1-Tg鼠血TG、TC含量明顯減少（P<0.05）；基因mRNA水平檢測(cè)顯示，與同齡WT鼠比較，喂養(yǎng)6個(gè)月和12個(gè)月后的JAZF1-Tg鼠肝臟中脂肪酸從頭合成相關(guān)基因（SREBP-1c，SCD-1，F(xiàn)A

3、S，ACC-1）表達(dá)明顯下調(diào)（P<0.05），而與脂肪酸氧化相關(guān)的基因（（PPAR-α，CPT-1）表達(dá)變化不明顯（p>0.05）；隨著年齡的增長，JAZF1基因的mRNA和蛋白水平表達(dá)明顯下調(diào)（P<0.05），而SREBP-1c基因的mRNA和蛋白水平表達(dá)明顯上調(diào)（P<0.05）。
　　結(jié)論：隨著年齡的增長，肝臟中JAZF1基因表達(dá)下調(diào)， JAZF1過表達(dá)可抵抗老齡化誘導(dǎo)的NAFLD的形成。
　　第二部分 JAZF1改善高

4、脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)的NAFLD的形成與發(fā)展
　　目的：探討JAZF1在高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)的NAFLD的形成與發(fā)展中的作用及相關(guān)分子機(jī)制。
　　方法：30只8周齡的JAZF1-Tg鼠和30只WT鼠分別隨機(jī)分為2組：普食喂養(yǎng)組（n=15）和高脂喂養(yǎng)組（n=15），各組小鼠喂養(yǎng)3個(gè)時(shí)間段（3個(gè)月，6個(gè)月，12個(gè)月），每個(gè)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)抽取高脂和普食喂養(yǎng)的JAZF1-Tg和WT鼠各5只。檢測(cè)各時(shí)間段小鼠的基礎(chǔ)生理代謝指標(biāo)以及肝臟中涉及脂肪酸從頭合成與

5、氧化相關(guān)基因的mRNA及蛋白水平。分析每個(gè)喂養(yǎng)階段小鼠肝臟中AMPK/ACC信號(hào)變化情況。
　　結(jié)果：HE染色結(jié)果顯示，隨著喂養(yǎng)時(shí)間的延長，高脂喂養(yǎng)的WT鼠肝臟中脂肪變性程度逐漸加重，由最初少量肉眼可見的脂滴沉積，到彌漫性的脂肪變性，甚至高脂12個(gè)月的時(shí)候出現(xiàn)了大泡性脂肪變性以及炎癥細(xì)胞的浸潤。但是，與同階段高脂喂養(yǎng)WT鼠比較，JAZF1-Tg鼠的基礎(chǔ)代謝指標(biāo)和肝臟中的TG，TC含量，以及組織學(xué)HE染色和油紅O染色結(jié)果均明顯改善。

6、基因檢測(cè)顯示，與同階段喂養(yǎng)的高脂WT鼠比較， JAZF1-Tg鼠肝臟中脂肪從頭合成相關(guān)基因的mRNA（SREBP-1c，SCD-1，F(xiàn)AS，ACC-1）明顯下調(diào),相關(guān)蛋白SREBP-1和FAS表達(dá)也呈現(xiàn)明顯下調(diào)（P<0.05），而與脂肪酸氧化相關(guān)基因的mRNA（PPAR-α，CPT-1）表達(dá)變化不明顯（p>0.05）；且在高脂喂養(yǎng)3個(gè)月和6個(gè)月時(shí)，與WT鼠比較，JAZF1-Tg鼠肝臟AMPK信號(hào)檢測(cè)顯示， AMPK及其下游靶蛋白ACC的

7、磷酸化均明顯增加（P<0.05）。
　　結(jié)論： JAZF1過表達(dá)主要通過減少脂肪的從頭合成，改善高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)的NAFLD的形成與發(fā)展。
　　第三部分 JAZF1減少脂肪酸誘導(dǎo)的肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)累積及相關(guān)機(jī)制研究
　　目的：探討JAZF1在脂肪酸誘導(dǎo)的肝細(xì)胞脂肪變性中的作用及相關(guān)分子機(jī)制。
　　方法：在小鼠的原代肝細(xì)胞（PMH細(xì)胞）以及人HepG2肝癌細(xì)胞中，利用1mM的FFAs（OA：PA=2:1的比例）誘導(dǎo)肝脂肪變

8、性細(xì)胞模型，同時(shí)，利用JAZF1過表達(dá)病毒（Ad-JAZF1）和JAZF1的抑制病毒(shJAZF1)分別過表達(dá)和抑制JAZF1的表達(dá)，探討JAZF1基因在FFAs誘導(dǎo)的肝細(xì)胞脂質(zhì)累積中的作用，檢測(cè)脂肪酸從頭合成相關(guān)基因（SREBP-1c，SCD-1，F(xiàn)AS，ACC-1）的mRNA及相關(guān)蛋白的表達(dá)，分析肝細(xì)胞中AMPK/ACC信號(hào)變化情況。同時(shí)，構(gòu)建SREBP-1c基因啟動(dòng)子，雙熒光素酶報(bào)告基因分析JAZF1基因?qū)REBP-1c基因啟

9、動(dòng)子的調(diào)控作用。
　　結(jié)果：在小鼠的PMH和人HepG2肝癌細(xì)胞中，均成功誘導(dǎo)了肝脂肪變性細(xì)胞模型。在兩種肝脂肪變性細(xì)胞中，JAZF1過表達(dá)減少FFAs誘導(dǎo)的 PMH和 HepG2細(xì)胞內(nèi)脂滴的累積，與 Ad-GFP組比較， Ad-JAZF1組在FFAs誘導(dǎo)的脂肪變性肝細(xì)胞中脂肪酸從頭合成基因的mRNA（SREBP-1c，SCD-1，F(xiàn)AS，ACC-1）和相關(guān)蛋白（SREBP-1， FAS）表達(dá)明顯下調(diào)（P<0.05）； JAZF1

10、抑制增多FFAs誘導(dǎo)的PMH和HepG2細(xì)胞內(nèi)脂滴的累積，與HK組比較，shJAZF1組在FFAs誘導(dǎo)的兩種脂肪變性肝細(xì)胞中脂肪酸從頭合成相關(guān)基因的 mRNA（SREBP-1c，SCD-1，F(xiàn)AS，ACC-1）和相關(guān)蛋白（SREBP-1，F(xiàn)AS）表達(dá)明顯上調(diào)（P<0.05）；與Ad-GFP組比較，Ad-JAZF1組在FFAs誘導(dǎo)的兩種脂肪變性肝細(xì)胞中AMPK及其下游靶蛋白ACC的磷酸化均明顯增加；與HK組比較，shJAZF1組在FFAs

11、誘導(dǎo)的HepG2脂肪變性肝細(xì)胞中AMPK及其下游靶蛋白ACC的磷酸化均明顯下降，在PMH脂肪變性肝細(xì)胞中，AMPK的磷酸化雖下降趨勢(shì)不明顯，但是ACC的磷酸化下降有明顯差異（P<0.05）；雙熒光素酶報(bào)告基因分析JAZF1基因在基礎(chǔ)狀態(tài)下對(duì)SREBP-1c基因啟動(dòng)子無明顯調(diào)控作用（p>0.05），但是在胰島素刺激下，JAZF1基因可顯著下調(diào)胰島素誘導(dǎo)的SREBP-1c基因啟動(dòng)子的活性（p<0.05）。
　　結(jié)論： JAZF1激活A(yù)