IETM在非酒精性脂肪性肝病發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf

1、目的：探討腸源性內(nèi)毒素血癥(intestinal endotoxemia，IETM)與胰島素抵抗(insulinresistance,IR)之間的關(guān)系，研究IETM在非酒精性脂肪肝性肝病(nonalcoholic fattyliver disease.NAFLD)發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法:實驗1.Wistar大鼠32只，雌雄各半，按隨機區(qū)組設(shè)計，分配雌雄兩個區(qū)組的大鼠為4組：正常對照組(normal control；NC)以正常

2、飼料喂養(yǎng)，不飽和脂肪酸組(unsaturated fatty acid；NSFA)以不飽和脂肪酸飼料喂養(yǎng)，飽和脂肪酸組(saturatedfatty acid；SFA)以飽和脂肪酸飼料喂養(yǎng)，高糖高脂組(high sucrose and high-fat dict：HSF)以高蔗糖高飽和脂肪酸飼料喂養(yǎng)，每組8只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)，造模9周形成NAFLD模型。肝臟蘇木素-伊紅(HE)、sudanⅣ染色觀察肝脂變，透射電鏡下觀察肝臟細胞及細

3、胞外基質(zhì)的超微結(jié)構(gòu)變化。測定空腹血糖(FPG)、空腹血胰島素(FINS)含量，外周血漿游離脂肪酸(FFA)，肝勻漿甘油三酯(TG)，外周血漿及肝組織勻漿腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，計算胰島素抵抗指數(shù)(IRI，HOMA-IR及胰島素敏感指數(shù)(ISI)。實驗2.動物和分組同實驗1，測定外周血漿內(nèi)毒素(LPS)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)，血漿及肝組織勻漿丙二醛(MDA)含量。免疫組化法測肝臟和腹部脂肪組織TNF-α，檢測各組動物肝臟和腹

4、部脂肪組織免疫組化TNF-α的表達。 結(jié)果：1.NAFLD大鼠模型建立情況： 肝臟HE、sudanIV染色結(jié)果證實：造模九周后，NSFA大鼠為單純性脂肪肝，SFA、HSF大鼠為脂肪性肝炎。電鏡下觀察肝臟線粒體腫脹變形，嵴排列紊亂，甚至斷裂消失，說明存在肝損傷。 2.血漿FFA、FINS、肝勻漿TG、血漿及肝勻漿TNF-α測定及IRI、ISI計算結(jié)果：三個模型組各指標與NC組比均有統(tǒng)計學意義；外周血漿FFA：NSF

5、A高于SFA，HSF高于SFA，但無統(tǒng)計學差異；肝勻漿TG：SFA組顯著高于NSFA組，HSF組顯著高于SFA組，有統(tǒng)計差異；FINS、IRI：SEA組高于NSFA組，HSF組高于SFA組，但無統(tǒng)計學差異；ISI：SFA組低于NSFA組，HSF組低于SFA組，但無統(tǒng)計差異；血漿及肝勻漿TNF-α：SFA組高于NSFA組，無統(tǒng)計差異，HSF組顯著高于SFA組，有統(tǒng)計差異。 3.外周血漿LPS、ALT、血漿及肝勻漿MDA測定結(jié)果：

6、 除NSFA組血漿ALT與NC組比無統(tǒng)計差異外，其他各組指標均有統(tǒng)計差異；血漿ALT、LPS、肝勻漿MDA：SFA組顯著高于NSFA組，HSF組顯著高于SFA組，有統(tǒng)計學差異；血漿MDA：SFA組高于NSFA組，HSF組高于SFA組，但無統(tǒng)計學差異。 4.肝組織及脂肪組織免疫組化TNF-α蛋白表達結(jié)果： 肝組織TNF-α：NSFA組與NC組比雖有增高，但無統(tǒng)計差異；SFA組、HSF組在統(tǒng)計學上均顯著高于NC組；SF

7、A組顯著高于NSFA組，HSF組顯著高于SFA組，有統(tǒng)計學差異。 脂肪組織TNF-α：NSFA組、SFA組、HSF組均顯著高于NC組，有統(tǒng)計學差異；SFA組高于NSFA組，HSF組高于SFA組，有顯著統(tǒng)計學意義。 5.電鏡結(jié)果： 三個模型組肝細胞線粒體均有不同程度的腫脹、變形、嵴斷裂消失等，SFA較NSFA嚴重，HSF較飽和組嚴重。 6.相關(guān)分析結(jié)果： (1)IR與體重、血漿FFA、血漿及肝勻漿。

8、TNF-α間存在正相關(guān)。 (2)LPS與體重、血漿ALT、FFA、血漿及肝勻漿TNF-α、MDA、肝組織及脂肪組織TNF-α蛋白間存在正相關(guān)。 1.肝脂肪變、脂肪性肝炎大鼠發(fā)生了胰島素抵抗，F(xiàn)FA、TNF-α與胰島素抵抗形成有關(guān)。 2.肝脂肪變、脂肪性肝炎大鼠發(fā)生了內(nèi)毒素血癥，內(nèi)毒素血癥與胰島素抵抗相關(guān)，LPS可能通過FFA、TNF-α啟動IR，導致肝損傷。 由此可以認為：腸源性內(nèi)毒素通過促進TNF-α的