非酒精性脂肪肝與肝癌關(guān)系的研究.pdf

1、研究目的：
　　 初步探討非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)與肝纖維化、肝硬化、肝細(xì)胞癌(HCC)之間的關(guān)系,并為解釋由NAFLD進(jìn)展至肝纖維化、肝硬化、HCC的可能機(jī)制,為NAFLD相關(guān)HCC的早期診斷提供實(shí)驗(yàn)性依據(jù)。
　　 研究方法：
　　 (1)選用高膽固醇高脂飼料喂養(yǎng)小鼠,逐步建立非酒精性單純性脂肪肝(NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及NASH相關(guān)肝纖維化的動(dòng)物模型:選用雄性昆明種小鼠60只,隨機(jī)

2、分為基礎(chǔ)飼料組(對(duì)照組,C組)和高膽固醇高脂飼料組(模型組,F組),每組30只,各組分別隨機(jī)設(shè)立4、8、12、16、24周5個(gè)時(shí)相點(diǎn),各組每個(gè)時(shí)相點(diǎn)6只小鼠,分別于不同時(shí)相點(diǎn)處死各組小鼠,獲取全血標(biāo)本,收集肝臟標(biāo)本,用于相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。
　　 (2)動(dòng)態(tài)觀察各組:①全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)小鼠血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、甲胎蛋白(AFP)含量;②Elisa法檢測(cè)小鼠血清瘦素(L

3、eptin)、胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-2(IGFBP-2)、異常凝血酶原(DCP)的含量;③分光光度法檢測(cè)小鼠肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)的含量;④鏡下觀察小鼠HE染色肝臟組織病理情況;⑤免疫組化SP法測(cè)定小鼠肝組織中環(huán)氧合酶-2(COX-2)、細(xì)胞角蛋白18(CK-18)的分布及表達(dá)。
　　 研究結(jié)果：
　　 (1)小鼠血清肝酶、血脂、肝癌血清標(biāo)志物的含量:與對(duì)照組4周相比,模型組血清AST

4、水平在第16周時(shí)明顯升高(P＜0.01),24周時(shí)稍有下降,但仍高于對(duì)照組4周(P＜0.05);模型組血清ALT水平在第8-16周時(shí)明顯升高(均P＜0.01),24周時(shí)稍有下降,但仍高于對(duì)照組4周(P＜0.05);模型組血清TC水平在第4-8周時(shí)升高(均P＜0.05),12周時(shí)明顯升高(P＜0.01),16周時(shí)稍有降低,但仍高于對(duì)照組4周(P＜0.05);模型組血清TG水平在第4周時(shí)升高(P＜0.05),8-12周時(shí)明顯升高(均P＜0.

5、01),16周時(shí)稍有降低,但仍高于對(duì)照組4周(P＜0.05);模型組血清AFP、DCP水平在第8周時(shí)均升高(均P＜0.05),12-24周均明顯升高(均P＜0.01)。
　　 (2)小鼠血清Leptin、IGFBP-2的含量:與對(duì)照組4周相比,模型組血清Leptin、IGFBP-2水平在第24周時(shí)均升高(均P＜0.05)。
　　 (3)小鼠肝組織氧化和抗氧化指標(biāo)的水平:與對(duì)照組4周相比,模型組肝組織SOD活性在第8周時(shí)下

6、降(P＜0.05),12-16周時(shí)明顯下降(均P＜0.01),24周時(shí)稍有回升,但仍低于對(duì)照組4周(P＜0.05);模型組肝組織MDA水平在第8-16周時(shí)明顯上升(均P＜0.01),24周時(shí)稍有回落,但仍高于對(duì)照組4周(P＜0.05)。
　　 (4)小鼠肝組織HE染色結(jié)果:對(duì)照組4周肝臟無(wú)異常發(fā)現(xiàn);模型組4周時(shí)肝臟呈現(xiàn)輕度脂肪變性,8周時(shí)脂肪變性加重,呈輕中度脂肪變性,12周時(shí)部分出現(xiàn)NASH征象,16周時(shí)呈中重度脂肪變性,部分

7、出現(xiàn)肝臟纖維組織增生,24周時(shí)呈重度脂肪變性,部分肝臟纖維化較前嚴(yán)重,有橋接纖維化。
　　 (5)小鼠肝組織免疫組織化學(xué)染色結(jié)果:對(duì)照組4周、模型組4-12周時(shí)肝組織COX-2、CK-18在血管壁均少量表達(dá),染色呈淺棕黃色,模型組16周時(shí)兩者的陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞均開(kāi)始增多,染色呈散在分布的淺棕黃色,模型組24周時(shí)兩者的陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)目均增多,程度增強(qiáng),COX-2陽(yáng)性細(xì)胞主要位于匯管區(qū)、肝血竇周?chē)约袄w維間隔;CK-18陽(yáng)性細(xì)胞從匯管區(qū)