ESRD血液透析患者血漿microRNA與炎癥因子的關系.pdf

1、背景：
　　終末期腎臟?。╡nd-stage renal disease,ESRD）死亡率和致殘率高，是國民醫(yī)療的重大支出之一。目前已有很多研究發(fā)現(xiàn)，ESRD血液透析患者普遍存在微炎癥狀態(tài)，繼發(fā)蛋白能量消耗(protein-energy wasting,PEW)，內(nèi)分泌紊亂，增加心血管疾病等多種并發(fā)癥的發(fā)病風險或成為其加重因素。因此，干預ESRD患者的微炎癥狀態(tài)，對于改善其預后、減少并發(fā)癥具有重要的理論意義。外周血循環(huán)中含有Mic

2、roRNAs，通常以外泌體的形式被分泌到細胞外，它是一種內(nèi)源性的非編碼RNA分子，長度一般在19-24個核苷酸序列。我們發(fā)現(xiàn)miR-574-5p和miR-32-3P富含GU序列，該序列與激活TLR7/TLR8（Toll-likeReceptors,TLRs）的單鏈RNA接近。TLRs通過識別和結合相應的病原相關分子模式（Pathogen-Associated Molecular Patterns,PAMPs)，激活轉錄因子，活化炎癥因子

3、和趨化因子的表達。其中TLR7和TLR8信號傳導依賴于核內(nèi)體酸化傳導，并通過識別核內(nèi)體或溶酶體區(qū)室中的ssRNA，導致炎癥和調(diào)節(jié)性細胞因子的分泌。本實驗通過研究ESRD患者外周血中的miR-32-3p,miR-574-5p的表達水平以及和炎癥因子白介素-6(Interleukin6,IL-6)和腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的水平的關系，探討miR-32-3p,miR-574-5p在ESRD血

4、液透析患者炎癥狀態(tài)中的意義，從而為進一步干預ESRD患者的微炎癥狀態(tài)提供理論依據(jù)。
　　實驗方法：
　　共納入符合標準的ESRD血液透析患者30例，健康對照組10例。根據(jù)2012年改善全球腎臟病預后組織（Kidney Disease Improving Global Outcomes,KDIGO）CKD評估與管理臨床實踐指南中對ESRD的定義為標準，選取接受維持性血液透析（每周3次）的患者作為實驗組，同時需排除下列患者：年齡

5、>75歲患者，入組前3個月內(nèi)使用糖皮質(zhì)激素和／或其他免疫抑制劑治療，或并發(fā)腫瘤、急性冠脈綜合征、腦卒中、肝和血液系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病腎損害、活動性結核、急性感染、消化道出血及心衰等并發(fā)癥患者。選取在大連醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院體檢中心采集年齡、性別與上述終末期腎臟病患者匹配的無重大疾病史的健康人作為正常對照組。
　　采集外周血2ml于EDTA抗凝管中，離心后提取血漿。應用德國Qiagen公司的MiRNeasySerum／Plasm

6、a Kit試劑盒提取microRNA。逆轉錄為cDNA后，采用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)法測定miR-32-3p,miR-574-5p的相對表達量。于大連醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院檢驗科應用化學發(fā)光（抗原抗體反應）法進行IL-6和TNF-α的檢測。
　　所有計量資料通過±s表示，應用SPSS version19.0進行數(shù)據(jù)分析。如計量資料服從正態(tài)分布，兩組間比較采用兩獨立樣本t檢驗。計量資料不服從正態(tài)分布則采用Mann-Whi

7、tney U檢驗。通過相對定量法（2-ΔΔCt法）計算出實驗組與正常對照組miR-32-3p，miR-574-5p的相對表達水平。miR-32-3p，miR-574-5p與IL-6,TNF-α的相互關系采用Spearman相關性分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1.與對照組相比miR-574-5p的相對表達水平在實驗組中顯著上調(diào)。實驗組miR-574-5p相對表達水平均值為11.50±11.70，對照

8、組為平均值為1.29±0.90，經(jīng)Mann-Whitney U檢驗，P<0.01(P=0.001)故兩組間miR-574-5p相對表達水平具有統(tǒng)計學意義。
　　2.與對照組相比實驗組IL-6水平顯著升高。實驗組IL-6水平均值為15.35±13.49，對照組為平均值為1.46±1.32，經(jīng)Mann-Whitney U檢驗，P<0.05(P=0.001)故兩組間IL-6表達水平具有統(tǒng)計學意義。
　　3.與對照組相比實驗組TNF

9、-α水平顯著升高。實驗組TNF-α水平平均值為55.39±48.62，對照組平均值為9.38±2.69，經(jīng)Mann-Whitney U檢驗，P<0.05(P=0.001)故兩組間TNF-α表達水平具有統(tǒng)計學意義。
　　4.與對照組相比miR-32-3p的相對表達水平在實驗組未見顯著統(tǒng)計學差異。實驗組miR-32-3p相對表達水平均值為2.09±1.63，對照組為平均值為1.29±1.05，經(jīng)Mann-Whitney U檢驗，P>0

10、.05故兩組間miR-32-3p相對表達水平無統(tǒng)計學意義。
　　5. Spearman相關性分析：
　　(1)miR-574-5p在實驗組中的相對表達與IL-6具有正相關關系，P<0.01(P=0.001)，相關系數(shù)r=0.79。
　　(2)miR-574-5p在實驗組中的相對表達于TNF-α具有正相關關系，P<0.01(0.001)，相關系數(shù)r=0.50。
　　(3)miR-32-3p在實驗組中的相對表達于IL