T7肽修飾PEG--PAMAM丹參酮ⅡA腦靶向納米遞藥系統(tǒng)的研究.pdf

1、缺血性腦卒中具有高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率等特點(diǎn)，嚴(yán)重危害人類的生命健康安全。而且由于血腦屏障(blood brain barrier，BBB)的存在，使得許多神經(jīng)保護(hù)性化合物向大腦遞送困難，對(duì)治療缺血性腦卒中的效果始終不理想。因此，使神經(jīng)保護(hù)藥物有效通過(guò)BBB是治療缺血性腦卒中需要迫切解決的難題。
　　實(shí)驗(yàn)研究已經(jīng)證明，采用特異性靶向配體修飾的納米顆粒具有高效穿過(guò)BBB的能力。聚酰胺-胺(Polyamide amine，PAM

2、AM)樹(shù)狀大分子作為一種新型多功能納米載體，越來(lái)越多被用于生物活性物質(zhì)遞送和控制藥物釋放，這主要由于其可通過(guò)共價(jià)鍵或物理吸收的方式可將藥物負(fù)載在疏水性的空腔內(nèi)，具有顯著的表面分子附著力。
　　所以本研究以PAMAM樹(shù)狀大分子為基質(zhì)藥物載體，采用雙官能團(tuán)聚乙二醇(NHS-PEG-MAL)修飾PAMAM，通過(guò)靶向配體T7肽修飾PEG-PAMAM納米粒(nanoparticles，NPs)，最后采用物理包埋的方式包載丹參酮ⅡA(Tans

3、hmoneⅡA，TSⅡA)制備T7-PEG-PAMAM/TSⅡA NPs納米遞藥系統(tǒng)，并進(jìn)行了體內(nèi)靶向性和藥效學(xué)方面的研究，具體研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:
　　1、以乙二胺和丙烯酸甲酯為反應(yīng)物，通過(guò)邁克爾加成和酰胺化反應(yīng)交替進(jìn)行制備第5.0代(generation，5.0G)PAMAM樹(shù)狀大分子，再與NHS-PEG-MAL反應(yīng)成功制備PEG-PAMAM聚合物。
　　2、通過(guò)T7肽末端的巰基與NHS-PEG-MAL分子鏈末端的馬來(lái)酰

4、亞胺(MAL)基團(tuán)偶聯(lián)制備T7-PEG-PAMAM NPs，在掃描電鏡下觀察T7-PEG-PAMAM NPs的形態(tài)呈橢圓狀而且無(wú)粘連，測(cè)定T7-PEG-PAMAM NPs的平均粒徑138±0.229nm，zeta電位2.44±0.62mV。
　　3、采用物理包埋法制備T7-PEG-PAMAM/TSⅡA NPs納米遞藥系統(tǒng)，通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定其包封率為75.14％，載藥量為23.17％，通過(guò)透析法考察了T7-PEG-PAMAM/

5、TSⅡA NPs的體外釋藥行為，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與TSⅡA原藥相比，T7-PEG-PAMAM NPs具有明顯的藥物緩釋作用。
　　4、對(duì)小鼠尾靜脈注射熒光探針DiR標(biāo)記的PAMAM NPs、PEG-PAMAM NPs和T7-PEG-PAMAM NPs，進(jìn)行體內(nèi)熒光分布研究。結(jié)果表明，DiR標(biāo)記的T7-PEG-PAMAM NPs在腦組織中的熒光強(qiáng)度明顯高于PEG-PAMAM組和PAMAM組，降低了在其它器官的分布，并且DiR-T7-P

6、EG-PAMAM NPs在注射1.5h后，在小鼠腦部的熒光富集達(dá)到高峰，說(shuō)明T7-PEG-PAMAM NPs具有較好的腦靶向性。
　　5、通過(guò)大腦中動(dòng)脈閉塞(MCAO)模擬SD大鼠的缺血性腦卒中。以游離的TSⅡA混懸液和以腦缺血再灌注大鼠為對(duì)照組，進(jìn)行T7-PEG-PAMAM/TSⅡA的藥效學(xué)研究。測(cè)量腦缺血再灌注損傷后的梗死體積，進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分，以及測(cè)量腦組織勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)、Na+-K+-ATP酶、谷胱甘肽