丹參酮ⅡA在大鼠肺臟的藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、丹參酮ⅡA是中藥丹參的主要活性成分之一，具有多種藥理作用。之前的研究表明，丹參酮ⅡA靜脈給藥后在大鼠體內(nèi)組織分布廣泛，特別是在肺臟長(zhǎng)期儲(chǔ)留，可達(dá)12天。丹參酮ⅡA在肺部大量?jī)?chǔ)留可能與其藥效學(xué)有密切聯(lián)系，但丹參酮ⅡA在肺臟儲(chǔ)留的藥代動(dòng)力學(xué)機(jī)制并不清楚。本研究將在整體動(dòng)物水平研究丹參酮ⅡA在大鼠肺臟的首過(guò)效應(yīng)，然后在亞細(xì)胞水平研究丹參酮ⅡA在肺組織的細(xì)胞器分布，以解釋在肺內(nèi)儲(chǔ)留的藥代動(dòng)力學(xué)機(jī)制。研究結(jié)果有助于了解丹參酮ⅡA的藥代動(dòng)力學(xué)特征，

2、為下一步更好地開發(fā)和利用丹參酮ⅡA提供科學(xué)依據(jù)。
　　 一、生物樣品中丹參酮ⅡA檢測(cè)的LC-MS/MS分析方法的驗(yàn)證。
　　 建立并確證測(cè)定生物樣品中丹參酮ⅡA濃度的靈敏、特異、可靠、線性范圍廣的LC-MS/MS分析方法。生物樣品采用乙酸乙酯液-液萃取法進(jìn)行抽提，內(nèi)標(biāo)為氯雷他定(Loratadine)。采用實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)建立的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的方法檢測(cè)。每個(gè)樣品的分析時(shí)間為2.5min。分析方法的定量下限為1.0ng/mL

3、，各生物樣品中丹參酮ⅡA的線性相關(guān)程度良好(r2均大于0.99)。以質(zhì)控樣品計(jì)算該分析方法的批內(nèi)精密度RSD在0.60％～12.79％范圍內(nèi)，批間精密度RSD在1.05％～13.24％范圍內(nèi)；方法的準(zhǔn)確度在85.46％～114.50％之間；方法的提取回收率在45.58％～57.48％之間。各項(xiàng)穩(wěn)定性考察符合SFDA對(duì)生物樣品測(cè)定方法的要求。該分析方法經(jīng)驗(yàn)證結(jié)果滿意，樣品處理及檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)單、快速，可滿足丹參酮ⅡA肺臟藥代動(dòng)力學(xué)研究的要求。

4、
　　 二、丹參酮ⅡA在大鼠體內(nèi)的肺首過(guò)效應(yīng)研究。
　　 通過(guò)比較頸靜脈注射與頸動(dòng)脈注射兩種給藥途徑下大鼠血漿中原型丹參酮ⅡA與結(jié)合型丹參酮ⅡA的各藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，來(lái)考察丹參酮ⅡA在大鼠體內(nèi)的肺首過(guò)效應(yīng)。12只雄性SD大鼠分成兩組(一只死亡，數(shù)據(jù)缺失)，分別經(jīng)左頸動(dòng)脈、右頸靜脈給予丹參酮ⅡA6mg/kg。兩組于給藥前(0h)與給藥后3、5、7、10、15、30、45min及1、1.5、2、3、4、6、8、12h從左頸動(dòng)脈取血

5、。采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)方法測(cè)定血漿中丹參酮ⅡA的濃度，用非房室模型計(jì)算其藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果顯示，頸靜脈給藥組與頸動(dòng)脈給藥組大鼠的原型丹參酮ⅡA的AUC0→t存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，分別為(241.27±46.90)ng·h/L及(371.73±66.78)ng·h/L，AUC0→∞也存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。體內(nèi)清除率CL在頸靜脈及頸動(dòng)脈給藥組分別為(23.68±4.32)和(15.53±2.8

6、0)L/h/kg，組間有顯著差異(P＜0.05)。頸動(dòng)脈給藥組的葡萄糖醛酸結(jié)合型丹參酮ⅡA的AUC0→∞為(1131.01±382.54)ng·h/L，稍大于頸靜脈給藥組的(1012.56±247.40)ng·h/L，P值大于0.05。大鼠肺臟對(duì)丹參酮ⅡA的首過(guò)清除率為35.59mL/min，遠(yuǎn)大于大鼠肝臟的血流量。肺臟對(duì)丹參酮ⅡA的固有清除率為肺血流量Q的53.85％，為45.71mL/min。丹參酮ⅡA在大鼠體內(nèi)的肺首過(guò)效應(yīng)為0.3

7、5。
　　 三、丹參酮ⅡA在大鼠肝臟、肺臟內(nèi)細(xì)胞器的分布。
　　 考察給大鼠靜脈注射丹參酮ⅡA后，丹參酮ⅡA在大鼠肺組織內(nèi)細(xì)胞器的分布，并與其在肝臟中的細(xì)胞器分布比較，以解釋丹參酮在肺臟內(nèi)分布的藥代動(dòng)力學(xué)機(jī)制。大鼠經(jīng)頸靜脈給予丹參酮ⅡA6mg/kg，于給藥后0.5、3、6、9、12、24、36、48h后分批處死，取其肝、肺組織，制成組織勻漿，采用差速離心法分離細(xì)胞器。采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)方法測(cè)定

8、組織和細(xì)胞器中丹參酮ⅡA的濃度。大鼠右頸靜脈注射6mg/kg丹參酮ⅡA0.5h后，肺臟的原型丹參酮ⅡA濃度為(5454.71±1750.50)ng/g，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于肝臟中的(361.52±112.21)ng/g，約為肝臟中的15倍。給藥后大多數(shù)時(shí)間點(diǎn)，不論是原型還是結(jié)合型，丹參酮ⅡA在肺臟的蓄積濃度遠(yuǎn)高于在肝臟的濃度。丹參酮ⅡA經(jīng)頸靜脈給藥后，在肝臟和肝臟的各細(xì)胞器中，主要以結(jié)合型的形式存在，原型藥物量較少。而在肺臟中則不同，原型丹參酮ⅡA

9、比結(jié)合型稍多，但是濃度相差不大。丹參酮ⅡA在大鼠肝臟的微粒體和溶酶體部分分布較多，但是未發(fā)現(xiàn)明顯的蓄積部位。而在肺臟的五種細(xì)胞器中，不論是原型還是結(jié)合型，各時(shí)間點(diǎn)丹參酮ⅡA在第3部分的相對(duì)蓄積率明顯高于其他四部分，約為其他組的2～3倍。而且有多個(gè)時(shí)間點(diǎn)的原型和結(jié)合型丹參酮ⅡA的相對(duì)蓄積率在第3部分和其他細(xì)胞器的有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表明丹參酮ⅡA在大鼠肺臟主要蓄積于輕線粒體部分。這可能與丹參酮的高脂溶性有關(guān)，也提示丹參酮ⅡA在大鼠肺臟的線粒體可