酪氨酸蛋白磷酸酶在植物逆境脅迫與成花誘導(dǎo)中的作用機(jī)制.pdf

1、酪氨酸蛋白磷酸酶無論在動(dòng)物還是植物細(xì)胞中都起者重要的作用，在植物細(xì)胞中雖然越來越多的PTPase被發(fā)現(xiàn)，但對(duì)PTPase的具體功能了解甚少。最近，本實(shí)驗(yàn)室分別從玉米和擬南芥中克隆得到兩個(gè)基因即ZmRIDP1和PTP135。ZmRIDP1是一個(gè)新的PTPase成員，初步研究表明ZmRIDP1可能參與細(xì)胞逆境信息傳遞；PTP135T-DNA插入突變體具有超早花特性，意味著可能參與開花信息傳遞。本研究就是在此基礎(chǔ)上，通過分子操縱等多種手段，深

2、入探討ZmRIDP1和PTP135的具體功能，揭示其信息傳遞的具體機(jī)制。 將pGreen0229用MluⅠ和KpnⅠ切除，以除去致死基因rfA,同時(shí)連入熱擊應(yīng)答基因APX2的啟動(dòng)子。將ZmRIDP1從T載體酶切位點(diǎn)KpnⅠ和ApaⅠ切下，連入pGreen0229即最終構(gòu)建為pAPX2-ZmRIDP1誘導(dǎo)表達(dá)載體。pAPX2-ZmRIDP1在大腸桿菌DH5α擴(kuò)增后，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入擬南芥。獲得的T1代種子通過1/2MS培養(yǎng)基+

3、Basta除草劑篩選，并PCR驗(yàn)證，共得到9株轉(zhuǎn)化株。經(jīng)兩次篩選后，獲得T3代純和植株。熱擊可導(dǎo)致T3轉(zhuǎn)基因植株ZmRIDP1大量表達(dá)，而野生型植株沒有表達(dá)，表明APX2可以有效地驅(qū)動(dòng)ZmRIDP1表達(dá)且轉(zhuǎn)基因獲得成功。熱擊可導(dǎo)致T3轉(zhuǎn)基因植株RD19，NCED和AAO3大量表達(dá)，表明ZmRIDP1可以介導(dǎo)干旱應(yīng)答基因的表達(dá)且在干旱誘導(dǎo)ABA信號(hào)產(chǎn)生中起著重要作用。 研究表明，PTP135和PTP136T-DNA插入突變體具有與

4、phyB突變體相似的特征。RT-PCR分析表明，和野生型相比，PTP135T-DNA插入突變體中CO，F(xiàn)T基因的表達(dá)明顯增強(qiáng)，且表達(dá)時(shí)間延長，說明PTP135基因在成花誘導(dǎo)的光周期途徑中起作用，其作用位點(diǎn)在CO基因的上游。和phyB一樣，紅光可導(dǎo)致PTP135T-DNA插入突變體下胚軸伸長，表明這兩個(gè)基因可能在紅光誘導(dǎo)的phyB通路中起作用。進(jìn)一步的雜交實(shí)驗(yàn)得到雙雜交F1代雜合體，雜交雜合體呈現(xiàn)出更明顯的phyB缺失表型。以上結(jié)果表明，