Mfn2在子癇前期患者血清中的表達(dá)及Mfn2對(duì)JEG-3細(xì)胞侵襲能力的作用.pdf

1、背景：
　　子癇前期是妊娠期特有的疾病，其發(fā)病機(jī)制尚不明確，目前廣泛認(rèn)同的發(fā)病機(jī)制為“兩階段學(xué)說(shuō)”，其主要內(nèi)容為滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)功能障礙及子宮螺旋小動(dòng)脈重鑄異常，致使胎盤(pán)缺血缺氧，引起子癇前期的發(fā)生[1]。線粒體融合蛋白2（Mfn2）是線粒體動(dòng)力蛋白之一，定位于線粒體外膜，促進(jìn)線粒體融合，參與線粒體的形態(tài)和功能調(diào)節(jié)、細(xì)胞能量代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、增殖、凋亡等眾多細(xì)胞生物學(xué)過(guò)程[2,3]。已有研究發(fā)現(xiàn)線粒體融合蛋白2在子癇前期患者胎盤(pán)組織中表

2、達(dá)下降，并且線粒體融合蛋白-2在孕早期胚胎的發(fā)育中起著重要作用[4-6]。但線粒體融合蛋白-2在孕婦母體外周血清中的表達(dá)及對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力的影響尚不清楚。
　　目的：
　　了解線粒體融合蛋白-2在子癇前期母體外周血清及正常孕婦外周血清中的表達(dá)情況，研究線粒體融合蛋白-2低表達(dá)對(duì)絨毛膜癌滋養(yǎng)細(xì)胞JEG-3細(xì)胞侵襲能力的影響，進(jìn)而探討線粒體融合蛋白-2在子癇前期中的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1標(biāo)本采集：收集子癇前

3、期、妊娠期高血壓及正常孕婦母體外周血，5000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，將血清收集于1.5毫升EP管，-80度冰箱保存。
　　2使用Mfn2 ELISA試劑盒（優(yōu)爾生）檢測(cè)三組母體外周血清中線粒體融合蛋白-2水平。
　　3構(gòu)建并篩選Mfn2低表達(dá)質(zhì)粒。
　　4 JEG-3細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染：所有試驗(yàn)中JEG-3細(xì)胞均分為3組培養(yǎng)，即空白對(duì)照組、轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組、Mfn2低表達(dá)組。其中細(xì)胞培養(yǎng)使用DMEM培養(yǎng)基，血清濃度為10％，轉(zhuǎn)染

4、試劑為T(mén)IANGEN轉(zhuǎn)染試劑。
　　5檢測(cè)指標(biāo)：（1）應(yīng)用Western Blot方法檢測(cè)各處理組線粒體融合蛋白-2的表達(dá)情況；（2）通過(guò)MTT試驗(yàn)檢查各組中JEG-3細(xì)胞的增殖能力；（3）通過(guò)劃痕試驗(yàn)分析線粒體融合蛋白-2表達(dá)下降后JEG-3細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng)能力；（4）通過(guò)Transwell試驗(yàn)分析線粒體融合蛋白-2表達(dá)下降后JEG-3細(xì)胞的侵襲能力。
　　6通過(guò)SPSS18.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果

5、：
　　1收集的子癇前期患者血清標(biāo)本20例，妊娠期高血壓患者血清標(biāo)本18例，正常妊娠血清標(biāo)本35例。所有患者的入選標(biāo)準(zhǔn)均根據(jù)ACOG標(biāo)準(zhǔn)，且滿足以下條件：孕周大于32周；單胎；非IVF-ET妊娠；年齡介于20-35歲；無(wú)其他妊娠合并癥。
　　2入選的三組間年齡構(gòu)成：子癇前期組平均年齡為29.65±4.66歲，妊娠期高血壓組平均年齡為31.00±4.65歲，正常妊娠組平均年齡為29.11±3.55歲，各組在年齡構(gòu)成上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差

6、異，P>0.05。
　　3使用ELISA試劑盒對(duì)母體外周血清Mfn2蛋白檢測(cè)結(jié)果：子癇前期及妊娠期高血壓患者母體外周血清Mfn2蛋白表達(dá)水平較正常妊娠組母體外周血清水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。但是子癇前期組與妊娠期高血壓組比較，線粒體融合蛋白-2在母體外周血清的表達(dá)水平?jīng)]有明顯差異，P>0.05。
　　4構(gòu)建并篩選質(zhì)粒結(jié)果：由吉?jiǎng)P基因公司構(gòu)建3個(gè)Mfn2低表達(dá)質(zhì)粒，并在其中篩選出干擾效果最優(yōu)的質(zhì)粒為Mfn2RN

7、Ai19851。
　　5細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果：將構(gòu)建的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染JEG-3細(xì)胞后，線粒體融合蛋白-2低表達(dá)，提示成功構(gòu)建線粒體融合蛋白-2低表達(dá)的細(xì)胞模型；在線粒體融合蛋白-2低表達(dá)組，JEG-3細(xì)胞的侵襲、遷移能力下降（P<0.05），但細(xì)胞增殖能力無(wú)明顯變化（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1線粒體融合蛋白-2可能作為子癇前期早期篩查的標(biāo)記物。
　　2線粒體融合蛋白-2可能通過(guò)影響滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲能力而參與子癇前期的發(fā)