Mfn2過表達對七氟醚后處理糖尿病大鼠心肌損傷及細胞凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　探討線粒體融合蛋白2（Mfn2）重組腺病毒過表達后能否對七氟醚后處理糖尿病大鼠的心肌缺血再灌注損傷及細胞凋亡產(chǎn)生影響，為糖尿病病人的心肌保護提供新的理論依據(jù)和臨床思維。
　　方法：
　?。?）糖尿病SD大鼠合并心肌缺血再灌注損傷模型的建立。210~260g雄性SD大鼠45只，分為3組（n=15）：正常對照組（NC組）15只，糖尿病對照組（DMS組）15只，糖尿病合并心肌缺血再灌注損傷組（DMIR組）15只。

2、DMIR組選用大鼠腹腔給與鏈脲佐菌素（STZ，60mg/kg）并在心臟結(jié)扎冠狀動脈左前降支（LAD）30min后，再灌注120min的方法建造模型；NS組大鼠則要腹腔給與等量的枸櫞酸鈉緩沖液以做對照；DMS組大鼠給與鏈脲佐菌素（STZ，60mg/kg）并在LAD下穿線。各組大鼠在造模前，給與STZ后1、2、3和4周后測大鼠空腹血糖值、體重（包括心臟濕重和左心室質(zhì)量）、尿量還有飲水量，造模成功后測定心梗面積，HE染色觀察心臟的心肌病理學(xué)損

3、傷是否嚴重。
　?。?）Mfn2重組腺病毒（Adv-Mfn2）過表達后是否對七氟醚后處理對糖尿病大鼠心肌缺血再灌注損傷及細胞凋亡有影響。這部分實驗要模仿第一部分制造糖尿病大鼠心臟缺血再灌注損傷模型的造模過程，并選用隨機數(shù)字表法將大鼠分為5組（n=9）：糖尿病對照組（C組），糖尿病合并心肌缺血再灌注組（I組），糖尿病心肌缺血再灌注后加七氟醚后處理組（IS組），糖尿病心肌缺血再灌注后給與空載體再加七氟醚后處理組（IAS組），糖尿病心肌

4、缺血再灌注加Mfn2重組腺病毒再加七氟醚后處理組（IMS組）。C組大鼠只在LAD下穿線不結(jié)扎；I組大鼠結(jié)扎
　　LAD30min，再灌注120min制造模型；IS組大鼠要在灌注前5min吸入麻醉藥七氟醚，吸入5min后松開LAD選擇再灌注120min的方法制造模型；IAS組大鼠在制造糖尿病模型的同時，先麻醉好大鼠，經(jīng)舌下靜脈給予空載體（Adv），其余處理同IS組；IMS組大鼠在制造糖尿病模型的同時，先麻醉大鼠，然后經(jīng)舌下靜脈給予A

5、dv-Mfn2腺病毒，其余處理同IS組。每組大鼠選擇在灌注120min后經(jīng)腹主動脈取血，檢測肌酸激酶同工酶（CK-MB）和肌鈣蛋白（cTnI）的含量；處理死大鼠后，取下心臟，采用TUNEL方法檢測心肌凋亡指數(shù)（AI）是否變化，HE染色后觀察心臟的心肌病理學(xué)損傷，觀察其是否損傷，選用Western-blot法測定心肌Mfn2表達，觀察其是否上調(diào)。
　　結(jié)果：
　?。?）NC組大鼠隨著時間的推移體重慢慢增加，活動也活躍，毛發(fā)光亮

6、還比較潔白。糖尿病大鼠（DMS組和DMIR組）模型1周后，2周后及3、4周后空腹的血糖值都＞16.7mmol/L，而且在造模后1、2、3和4周后穩(wěn)定在比較高的水平，糖尿病大鼠（DMS組和DMIR組）的空腹血糖值、體重、還有尿量與飲水量與相同時間點NC組的空腹血糖值、體重值、尿量與飲水量值相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。隨著糖尿病程延長，大鼠活動減少，出現(xiàn)消瘦，皮下脂肪明顯減少，皮毛松散，暗黃無光澤。與NC組對比，DMS組和DMIR

7、組大鼠體重值、心臟濕重值和左心室質(zhì)量明顯出現(xiàn)了降低，DMIR組心梗面積也增加（P＜0.05）；與DMS組比較，DMIR組老鼠體重值、心臟濕重值和左心室質(zhì)量相比差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），心梗面積相應(yīng)增加（P＜0.05）。數(shù)字病理切片掃描器下NC組心肌纖維結(jié)構(gòu)清晰光整，染色很均勻，細胞形態(tài)結(jié)果也正常；DMS組心肌纖維順序基本完整，細胞有輕度的水腫，能看見少量的炎癥細胞局部侵潤；DMIR組心肌細胞腫脹明顯，心肌細胞彌漫性缺血和壞死，

8、排列很不規(guī)則、無序，斷裂明顯，形態(tài)別扭，邊界看不清。
　　（2）與C組比較，I組、IS組、IAS組、IMS組大鼠血清CK-MB、cTnI均升高，心肌細胞AI均增加（P＜0.05），心肌纖維病理學(xué)傷害都嚴重，并且I組、IS組和IAS組三組大鼠心肌細胞的Mfn2表達也下調(diào)了（P＜0.05），而IMS組的大鼠心肌Mfn2上調(diào)（P＜0.05）。與I組比較，IMS組的大鼠血清中CK-MB、cTnI、心肌細胞AI降低（P＜0.05），心肌病理

9、學(xué)傷害減輕，心肌細胞Mfn2表達上升（P＜0.05）。與IS組比較，IMS組大鼠血清中CK-MB、cTnI、心肌細胞AI都降低（P＜0.05），心肌病理學(xué)傷害減輕，心肌Mfn2表達上升（P＜0.05）。與IAS組比較， IMS組大鼠的血清中CK-MB活性、cTnI濃度、心肌細胞AI值降低（P＜0.05），心肌病理學(xué)傷害減輕，心肌Mfn2表達上升（P＜0.05）。I組、IS組和IAS組大鼠的血清中CK-MB活性、cTnI濃度、心肌細胞AI

10、值及心肌Mfn2表達量差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），心肌病理學(xué)損傷變化不是特別明顯。
　　結(jié)論：
　?。?）糖尿病心肌缺血再灌注的造模采選用大鼠腹腔給予STZ（60mg/kg）還結(jié)扎 LAD的方法造模。這種方法造模方式簡單、可靠、易行，造模成功率非常高，穩(wěn)定性也好，是糖尿病心肌缺血有關(guān)研究動物的理想模型。糖尿病大鼠造模后四周的血糖值及尿量都基本穩(wěn)定，是實驗進行心臟IR造模的最好時期。
　?。?）糖尿病因素可以消除