魚精蛋白包覆PLGA納米粒用于乙肝疫苗載體的初步研究.pdf

1、本論文的研究工作主要分為兩部分,第一部分初步探討了抗菌肽SK84結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,第二部分介紹了魚精蛋白包覆PLGA納米粒用于乙肝疫苗載體的初步研究。
　　第一部分:抗菌肽是從低等生物到包括人在內(nèi)的高等生物在遭遇外源微生物入侵時(shí),自身產(chǎn)生具有免疫調(diào)節(jié)和抗菌活性的生物小肽。由于殺菌效果好、抗菌譜廣、種類多、耙菌株不易產(chǎn)生耐藥性等特點(diǎn),使其被認(rèn)為是取代抗生素的最佳藥物。SK84是2004年陸婕博士從蠅蛆中分離純化出的具有高效殺菌作用的

2、抗菌肽,該肽富含Gly,具有Gly二聯(lián)體、Gly六聯(lián)體、GxxxG等柔韌結(jié)構(gòu),對(duì)裂解細(xì)胞膜、最終殺死細(xì)胞具有重要作用。為了解抗菌肽SK84結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,我們截短了N端18個(gè)氨基酸(S19K84),開展的主要工作如下:
　　(1)構(gòu)建融合質(zhì)粒pET32a-s19k84-6his(前期工作已構(gòu)建了pET32a-sk84-6his),原核誘導(dǎo)表達(dá)并分離純化獲得基因重組蛋白SK84-6His、S19K84-6His;
　　(2)

3、抑菌圈法與微量法檢測(cè)結(jié)果顯示:S19K84-6His與SK84-6His相比,活性明顯降低;
　　(3)圓二色譜分析表明,S19K84-6His中的α螺旋減少53.8％,而α螺旋是抗菌肽發(fā)揮抑菌作用的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。
　　此研究表明,SK84-6His中N端富Gly區(qū)能夠影響抗菌肽α螺旋的形成,對(duì)抗菌活性有很大的影響,為進(jìn)一步研究SK84結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　第二部分:聚乳酸羥基乙酸(PLGA)包裹藥物制備成納

4、米粒具有保持藥物的活性、增加藥物的攝取、控制藥物的釋放等作用,而用魚精蛋白包覆PLGA納米粒,能有效地增強(qiáng)樹突細(xì)胞(DC)對(duì)外源性抗原的交叉遞呈作用,誘導(dǎo)更有效的免疫反應(yīng)。為開展魚精蛋白包覆PLGA納米粒用于乙肝疫苗的研究,我們以O(shè)VA和HBsAg為藥物模型,用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備了PLGA-OVA納米粒、PLGA-HBsAg納米粒、PLGA-HBsAg/PS納米粒,結(jié)果如下:
　　(1)制備了PLGA-OVA納米粒,并考察其在體外

5、的釋放情況,分為突釋與緩釋兩個(gè)階段;
　　(2)從PVA類型、PVA濃度、超聲時(shí)間、外水相體積、藥物濃度5個(gè)方面優(yōu)化制備納米粒的條件,獲得粒徑237.9±14.4nm、分散系數(shù)PDI0.089±0.006、Zeta電位-13.2±2.1mv的PLGA-HBsAg納米粒,在4℃能穩(wěn)定保存20d。用魚精蛋白包覆PLGA-HBsAg納米粒后,Zeta電位由負(fù)變正,粒徑、分散系數(shù)、Zeta電位分別為:268.4±10.6nm,0.162±