S層蛋白包覆脂質(zhì)體作為口服疫苗載體的研究.pdf

1、陽離子脂質(zhì)體在藥物遞送系統(tǒng)中具有較大的應(yīng)用價值，細菌的表層蛋白即S層蛋白(Slps)，由于具有獨特的自組裝性能，離體后能在界面自組裝排列，用于包覆陽離子脂質(zhì)體可提高脂質(zhì)體的穩(wěn)定性和增加胃腸道粘附性，可作為較好的口服疫苗載體。但Slps與陽離子脂質(zhì)體之間的相互作用和Slps包覆的脂質(zhì)體作為口服疫苗載體的應(yīng)用都鮮有報道。
　　本文從瑞士乳桿菌中提取Slps，以純度和濃度為標(biāo)準(zhǔn)比較三種變性劑對Slps的提取，最終確定使用5M的氯化鋰提取

2、Slps。采用物理混合方法，將Slps稀釋成不同濃度包覆于Eudragit(@)RL100和N，N-二甲基-(N'，N'-雙(硬脂?；?1-乙基)）1，3-丙二胺(DMSP)制備的兩種陽離子脂質(zhì)體上。通過測定Slps包覆兩種陽離子脂質(zhì)體的電位粒徑的變化和觀察脂質(zhì)體的透射電鏡圖，以反應(yīng)兩者相互作用的動態(tài)過程。發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體隨著Slps的不斷加入，Eudragit(@)RL100制備的陽離子脂質(zhì)體電位從+51.6±2.3mV逐漸降至+14.6±

3、0.8mV，DMSP制備的陽離子脂質(zhì)體電位從+50.8±2.1mV逐漸降至+39.7±2.4mV，都發(fā)生了顯著降低。但Eudragit(@)RL100制備的陽離子脂質(zhì)體的粒徑(158.0±2.1nm)和DMSP制備的陽離子脂質(zhì)體的粒徑(180.8±10.3nm)幾乎未改變。
　　為考察Slps包覆脂質(zhì)體的性能，本文首先制備熒光脂質(zhì)體，測定Slps對熒光脂質(zhì)體淬滅效應(yīng)的阻滯作用，以證明Slps包覆于脂質(zhì)體表面。通過制備硬脂胺-異硫氰

4、基熒光素嫁接物，將其與脂質(zhì)體高溫混合，加入不同濃度碘化鉀，發(fā)現(xiàn)熒光脂質(zhì)體被Slps包覆之后，Eudragit(@)RL100陽離子脂質(zhì)體對碘化鉀的熒光淬滅阻滯作用增加了約7.85％～56.29％，DMSP陽離子脂質(zhì)體對碘化鉀的熒光淬滅阻滯作用增加了約9.96％～89.97％。然后利用紅外光譜(FTIR)考察Slps包覆脂質(zhì)體的作用力，比較Slps包覆陽離子脂質(zhì)體的凍干粉、Slps和陽離子脂質(zhì)體凍干粉物理混合物之間的紅外光譜，發(fā)現(xiàn)兩者譜圖

5、幾乎一致，說明Slps包覆的脂質(zhì)體與物理混合物一樣是非共價鍵的相互作用。最后通過小鼠灌胃實驗，觀察到Slps包覆的兩種陽離子脂質(zhì)體都能增加脂質(zhì)體對小鼠胃腸道黏膜的粘附性。
　　以乙型肝炎疫苗（釀酒酵母）為模型藥物以考察Slps包覆陽離子脂質(zhì)體作為口服疫苗載體的效果。首先確定雙波長G250法為脂質(zhì)體包封率的測定方法，然后采用逆相蒸發(fā)法制備粒徑561.2nm、電位24±0.36mV和疫苗包封率約85.3％的Slps包覆載疫苗陽離子脂質(zhì)

6、體（總脂質(zhì)與乙肝疫苗質(zhì)量濃度比為100∶1，與Slps質(zhì)量濃度比為5∶1）。通過分別給小鼠注射乙肝疫苗、口服乙肝疫苗、口服載乙肝疫苗陽離子脂質(zhì)體和口服Slps包覆的載乙肝疫苗陽離子脂質(zhì)體，于第8周、第10周和第12周取小鼠血清，采用小鼠免疫球蛋白G(IgG)酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)測定不同劑型刺激機體產(chǎn)生的IgG抗體水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙肝疫苗口服組幾乎無效果，脂質(zhì)體包載的乙肝疫苗口服組和Slps包覆載乙肝疫苗的脂質(zhì)體口服組能改善乙肝