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1、目的:探索在低氧誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞中,SCD1與VEGF表達(dá)之間的關(guān)系,從而為臨床基因治療缺血性臟病方面尋找新的治療靶點(diǎn)。
方法:1、常規(guī)H9C2心肌細(xì)胞培養(yǎng)傳代后,實(shí)驗(yàn)組H9C2細(xì)胞使用三氣培養(yǎng)箱建立細(xì)胞缺氧損傷模型,常氧組與低氧組采用RT-PCR檢測(cè)SCD1與VEGF mRNA的基因表達(dá),Western Blot檢測(cè)SCD1與VEGF蛋白的表達(dá);2、在低氧組中分別轉(zhuǎn)染siRNA SCD1與載有SCD1的脂質(zhì)體,普通低氧
2、對(duì)照組、上調(diào)SCD1基因表達(dá)組以及下調(diào)SCD1基因表達(dá)組分別采用RT-PCR和Western Blot檢測(cè)VEGF mRNA與蛋白表達(dá),本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果Western Blot灰度值結(jié)果用image J軟件分析,RT-PCR使用Bio-Rad的IQ5進(jìn)行結(jié)果分析,實(shí)驗(yàn)資料的統(tǒng)計(jì)均使用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0完成。各組測(cè)定結(jié)果均以(x±s)表示,組間差異比較用t檢驗(yàn),P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)果:1、H9C2心肌細(xì)胞低氧誘導(dǎo)
3、組與常氧對(duì)照組相比SCD1和VEGF基因以及蛋白的表達(dá)均明顯增高(P<0.05)。2、與低氧對(duì)照組相比,用siRNA SCD1轉(zhuǎn)染的低氧組VEGF基因及蛋白的表達(dá)均顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而用載有SCD1基因的脂質(zhì)體預(yù)處理的低氧組VEGF基因及蛋白的表達(dá)均顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:1、H9C2心肌細(xì)胞在低氧的條件下,SCD1與VEGF基因及蛋白水平表達(dá)均顯著升高,提示低氧可增加SC
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