過表達CrkL對H9C2心肌細胞株生物學行為的影響.pdf

1、目的:觀察在正常及缺氧/復氧(anoxia/reoxygenation,A/R)培養(yǎng)條件下過表達CrkL基因?qū)9C2心肌細胞骨架、凋亡及增殖的影響。
　　 方法:應用CrkL基因真核表達重組質(zhì)粒pCXN2-CrlL-Flag,經(jīng)脂質(zhì)體介導瞬時轉(zhuǎn)染心肌細胞H9C2,通過RT-PCR檢測CrkL mRNA的表達水平;Western Blot檢測CrkL蛋白的表達水平;共聚焦激光掃描顯微鏡(CLSM)觀察心肌細胞骨架變化;流式細胞術

2、(FCM)檢測心肌細胞的凋亡率;MTT比色法檢測心肌細胞的增殖。
　　 結果:重組質(zhì)粒pCXN2-CrkL-Flag轉(zhuǎn)染H9C2心肌細胞后,RT-PCR和Western檢測結果表明CrkL基因及蛋白能在H9C2心肌細胞中顯著表達,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01);CLSM觀察到在正常培養(yǎng)條件下過表達CrkL組均較空質(zhì)粒組及空白組心肌細胞F-actin增粗、密集、粘著斑增多,而在A/R培養(yǎng)條件下過表達CrkL組心肌細胞F-ac

3、tin基本正常,但空質(zhì)粒組及空白組F-actin排列紊亂,稀疏,胞漿內(nèi)應力纖維明顯減少;FCM術檢測結果顯示在正常及A/R培養(yǎng)條件下過表達CrkL組均較空質(zhì)粒組及空白組心肌細胞的凋亡率顯著下降(P＜0.01);MTT法檢測證實在正常及A/R培養(yǎng)條件下過表達CrkL組均較空質(zhì)粒組及空白組心肌細胞的存活力顯著增強(P＜0.05)。
　　 結論:過表達CrkL可使H9C2心肌細胞F-actin細胞骨架蛋白表達顯著增加,凋亡率顯著降低,