Intermedin對缺氧復(fù)氧所致H9c2心肌細胞氧化應(yīng)激損傷的保護作用.pdf

1、目的：
　　 通過培養(yǎng)Intermedin(IMD)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的大鼠H9c2心肌細胞建立缺氧/復(fù)氧(H/R)模型，證實IMD對心肌細胞的H/R氧化應(yīng)激損傷具有保護作用，為研究IMD基因?qū)π难芗膊〉淖饔眉胺肿由飳W(xué)機制奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 實驗分為四組：
　　 1）正常對照組：用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)H9c2心肌細胞48h;
　　 2)H/R組：常規(guī)培養(yǎng)H9c2心肌細胞48h后，用5mmol

2、/l的連二亞硫酸鈉使其缺氧2h，后用DMEM培養(yǎng)基復(fù)氧lh;
　　 3)H/R+空質(zhì)粒組（空質(zhì)粒組）：pIRES2-EGFP質(zhì)粒（即空質(zhì)粒）轉(zhuǎn)染后穩(wěn)定培養(yǎng)48h，之后給予缺氧/復(fù)氧處理；
　　 4)H/R+IMD質(zhì)粒組（IMD質(zhì)粒組）：PIRES2-EGFP/IMD質(zhì)粒（即IMD質(zhì)粒）轉(zhuǎn)染后穩(wěn)定培養(yǎng)48h，之后給予缺氧/復(fù)氧處理。實驗終止后，在倒置相差顯微鏡下觀察H9c2心肌細胞形態(tài)；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后48h，在熒光顯微鏡下觀察

3、心肌細胞形態(tài)；通過流式細胞儀檢測細胞轉(zhuǎn)染效率以確定質(zhì)粒的最佳轉(zhuǎn)染量；采用化學(xué)比色法測定細胞上清液中乳酸脫氫酶(IDH)的釋放；用硫代巴比妥酸顯色法測定細胞上清液中丙二醛(MDA)含量；用黃嘌呤氧化酶法測定細胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活性；運用流式細胞術(shù)檢測心肌細胞凋亡率。
　　 結(jié)果：
　　 (l)倒置相差顯微鏡下觀察H9c2心肌細胞為長梭形，呈魚群狀或漩渦狀排列，貼壁緊密；
　　 (2)熒光顯微鏡下觀察

4、心肌細胞胞漿內(nèi)呈現(xiàn)綠色熒光，呈長梭形，貼壁生長；
　　 (3)終濃度為lug/ml的質(zhì)粒細胞轉(zhuǎn)染效率最高；
　　 (4)與正常對照組相比，H/R組細胞上清液中LDH含量增加，MDA含量增加，SOD活性下降（p均＜0.05）；IMD質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染顯著逆轉(zhuǎn)了上述這些指標的變化，與H/R組相比具有顯著差異(p＜0.05)；空質(zhì)粒組與H/R組相較，各指標測定值無統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05)；
　　 (5)與正常對照組相比，H/