H9C2心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷時HIF-1與ROCK-1的表達(dá)及相互作用.pdf

1、目的:
　　研究在H9c2心肌細(xì)胞在缺氧/復(fù)氧（hypoxia/reoxygenation，H/R）條件下缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxia inducible factor-1，HIF-1)與ROCK激酶(Rho-associatedkinase1，ROCK-1)的表達(dá)及相互關(guān)系，以及兩者對心肌細(xì)胞的作用機(jī)制。
　　方法:
　　(1)通過體外培養(yǎng)H9c2心肌細(xì)胞，建立缺氧復(fù)氧模型（95％N2和5％CO2）;
　　(2

2、)通過Western blot印跡法分別檢測缺氧和復(fù)氧時HIF-1與RCOK-1的蛋白表達(dá)情況;篩選出表達(dá)最高的缺氧和復(fù)氧時間點(diǎn);
　　(3)在篩選好的缺氧10h和復(fù)氧6h、8h、10h時間點(diǎn)進(jìn)行缺氧復(fù)氧處理。然后實(shí)驗(yàn)分四組進(jìn)行:①正常對照組;②H/R組;③H/R加YC-1組(HIF-1抑制劑);④H/R加Y-27632組（ROCK-1抑制劑）;
　　(4)采用RT-PCR和Western blot印跡檢測各組間HIF-1與

3、ROCK-1的mRNA和蛋白表達(dá)情況，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況，MTT檢測細(xì)胞生長活力。
　　結(jié)果:
　　(1)心肌細(xì)胞缺氧處理時，HIF-1與ROCK-1蛋白表達(dá)量均明顯增加，缺氧10h時均有較明顯的表達(dá);
　　(2)在0～24h的復(fù)氧時間里，HIF-1與ROCK-1的蛋白表達(dá)在6h、8h、10h這三個時間段表達(dá)較高;
　　(3)于復(fù)氧6h、8h、10h時加入HIF-1抑制劑YC-1后，結(jié)果顯示:HIF-1及

4、ROCK-1的蛋白表達(dá)顯著低于對應(yīng)時間段的H/R組(P＜0.05);細(xì)胞凋亡率顯示與H/R組相應(yīng)各組間對比顯著降低(P＜0.05);MTT顯示細(xì)胞存活率與H/R組相比明顯升高(P＜0.05);
　　(4)于復(fù)氧6h、8h、10h時加入ROCK-1抑制劑Y-27632后，結(jié)果顯示:①ROCK-1的mRNA和蛋白表達(dá)均低于H/R組和正常組(P＜0.05)，而HIF-1的蛋白及mRNA表達(dá)明顯高于H/R組(P＜0.05);細(xì)胞凋亡率顯示

5、與H/R組相應(yīng)各組間對比顯著升高(P＜0.05);MTT顯示細(xì)胞存活率與H/R組相比，明顯降低下降(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1) H9c2心肌細(xì)胞在缺氧/復(fù)氧條件下，HIF-1與ROCK激酶分別在缺氧10h和12h表達(dá)達(dá)高峰;在復(fù)氧4h，6h，8h，10h有較高的表達(dá);
　　(2)抑制HIF-1的表達(dá)，可使H9c2心肌細(xì)胞在缺氧10h和復(fù)氧6h-10h時抑制細(xì)胞凋亡;
　　(3)在H9c2心肌細(xì)胞缺氧