胡黃連苷Ⅱ在酒精誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞損傷中的保護(hù)作用.pdf

1、目的
　　觀察不同濃度酒精對(duì)H9C2心肌細(xì)胞的影響以及胡黃連苷Ⅱ?qū)9C2心肌細(xì)胞酒精誘導(dǎo)的損傷的保護(hù)作用。
　　方法
　　H9C2心肌細(xì)胞在加入10％胎牛血清和雙聯(lián)抗生素的高糖DMEM培養(yǎng)基中于37℃，5％的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。隨機(jī)分為以下5組:正常對(duì)照組(Control)、酒精組(alcohol)、胡黃連苷Ⅱ-8組(picrosideⅡ1)、胡黃連苷Ⅱ-40組(picrosideⅡ2)、胡黃連苷Ⅱ-200

2、組(picrosideⅡ3);其中酒精組以不含酒精的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞24h后，在以酒精濃度為200mmol/L的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞24h后收取細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液;胡黃連苷Ⅱ-組以分別含胡黃連苷Ⅱ8、40、200mg/L的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞24h后，在以酒精濃度為200mmol/L的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞24h后收取細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液。采用MTT法檢測(cè)不同濃度胡黃連苷Ⅱ及酒精對(duì)H9C2細(xì)胞存活力的影響，在490nm測(cè)定吸光度，無(wú)

3、細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。采用相應(yīng)的試劑盒來(lái)分別檢測(cè)LDH，MDA，SOD，Gpx的活性。采用ROS試劑盒標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)活性氧，并使用倒置熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧的含量。
　　結(jié)果
　　1、形態(tài)學(xué)改變:顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)剛接種的心肌細(xì)胞成球形，24h后，大部分細(xì)胞已經(jīng)貼壁、逐漸擴(kuò)展，呈類三角形或不規(guī)則的星形，細(xì)胞伸出偽足，并相互交接成網(wǎng);酒精組細(xì)胞形態(tài)不一，漂浮細(xì)胞較多。
　　2、細(xì)胞存活率:(1)不同濃度胡黃連苷Ⅱ（0.

4、32-1000mg/L）處理細(xì)胞48h對(duì)細(xì)胞的存活率無(wú)明顯影響;(2)酒精以濃度依賴的方式導(dǎo)致細(xì)胞的存活率下降從100mmol/L時(shí)開(kāi)始有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，200mmol/L時(shí)細(xì)胞存活率下降更為明顯;(3)胡黃連苷Ⅱ預(yù)處理細(xì)胞24h可以濃度依賴的方式提高酒精所導(dǎo)致的細(xì)胞存活率的下降，從8mg/L開(kāi)始有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=O.016)，1000mg/L與200mg/L時(shí)比較生存率未明顯增加(P＞0.05)。
　　3、LDH活性

5、:胡黃連苷Ⅱ預(yù)處理細(xì)胞24h可以濃度依賴的方式降低酒精所導(dǎo)致的上清液中LDH的升高。
　　4、MDA含量:200mmol的酒精可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)MDA含量的升高，而胡黃連苷Ⅱ預(yù)處理細(xì)胞24h可以濃度依賴的方式降低酒精所導(dǎo)致的MDA的升高。
　　5、SOD及Gpx活性:200mmol的酒精可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)SOD及Gpx活性的降低，而胡黃連苷Ⅱ預(yù)處理細(xì)胞24h可以濃度依賴的方式提高酒精所導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)SOD及Gpx活性的降低。
　　6

6、、ROS活性:200mmol的酒精可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度增加，而胡黃連苷Ⅱ預(yù)處理細(xì)胞24h可以濃度依賴的方式降低酒精所導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度增加。
　　結(jié)論
　　1.胡黃連苷Ⅱ?qū)φＥ囵B(yǎng)的H9C2心肌細(xì)胞存活率無(wú)影響。
　　2.酒精對(duì)H9C2心肌細(xì)胞以濃度依賴的方式導(dǎo)致細(xì)胞存活降低。
　　3.胡黃連苷Ⅱ?qū)凭翲9C2心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷具有劑量依賴性保護(hù)作用，其保護(hù)作用部分是通過(guò)增加SOD、Gpx，降低MAD、R