伊馬替尼治療中miRNA及其靶基因在慢?；颊咧械谋磉_分析.pdf

1、慢性粒細胞白血病(CML)，簡稱慢粒，是一種惡性克隆增殖性造血系統(tǒng)疾病，起源于骨髓多能造血干細胞。95％的慢?；颊咴谶z傳學上具有Ph染色體，是9號染色體上的ABL基因與22號染色體上的BCR基因相互融合，最后形成bcr-abl融合基因，其編碼的P210融合蛋白參與形成了慢粒特征性的分子生物學標志。因為P210蛋白具有失調的酪氨酸激酶活性，故bcr-abl融合基因可以導致白血病的發(fā)生。最后造成造血細胞出現過度增殖，對骨髓基質的粘附性較前下

2、降和凋亡喪失等生物學特性的改變。BCR-ABL融合蛋白同時能激活多條與細胞增殖有關的信號通路，能改變DNA損傷修復途徑，最后引起致命性的血液系統(tǒng)腫瘤。因此，目前慢粒的各種治療方法都是圍繞著bcr-abl基因和其編碼的融合蛋白。
　　CML治療的顯著性進展為酪氨酸激酶抑制劑伊馬替尼的臨床應用，在慢性期患者中療效顯著，在加速期和急變期的患者中同樣能夠明顯延長患者的生存時間，是目前治療慢性粒細胞白血病的主要藥物之一，美國國家癌癥綜合網絡

3、(NCCN)首推伊馬替尼作為治療慢粒的藥物。從2000年開始我國在臨床上應用伊馬替尼進行治療CML，最近幾年的臨床觀察結果顯示，常規(guī)劑量伊馬替尼(300~400 mg/d)對大部分慢性期Ph+CML患者可以取得滿意的療效。然而隨著伊馬替尼的臨床應用，逐漸出現了耐藥現象，且在慢性粒細胞白血病加速期(AP)或急變期(Bc)的患者中更為多見。近幾年來關于伊馬替尼耐藥機制的研究很多，但普遍認為導致伊馬替尼耐藥的機制主要有：bcr-abl基因突變

4、和擴增，繼發(fā)其他核型改變，如del(7q)、de1(20q)、tri8、mono7等?，F多項研究表明microRNA(miRNA)可以作為腫瘤抑制基因和(或)癌基因，miRNA的異常表達通過促進癌細胞克隆的自我更新而引發(fā)一系列的耐藥。
　　miRNA是一類非編碼的微小RNA分子，它的生成主要經歷了原始轉錄本、前體和成熟體，最終的成熟體為19到24個堿基(nt)大小，能夠通過與靶mRNA3’非編碼區(qū)(UTR)特異性結合，在翻譯和轉錄

5、后水平調控靶基因的表達，與生物細胞的發(fā)展、分化、凋亡和增殖關系密切。
　　所以本課題旨在利用Real-time quantitative PCR(RT-PCR)技術從細胞水平檢測慢粒慢性期與病情進展的患者骨髓單個核細胞中miRNA分子的表達有無差異，具體篩選的miRNA分子分別為microRNA-21(miR-21)、miR-10a、miR-31、miR-34a、miR-155，如果表達確有明顯差異，我們進一步觀察上述miRNA及

6、其靶基因在CML敏感組與耐藥組患者骨髓單個核細胞中的表達差異情況。為慢粒耐藥患者提供新的治療靶點。
　　實驗一
　　目的：探討慢性期和進展期慢?；颊適iRNA的表達水平
　　方法:收集CML慢性期患者和病情進展患者的骨髓標本共35例。制備骨髓單個核細胞并抽提總RNA，利用紫外分光光度儀檢測RNA提取液的濃度和純度，最后利用RT-PCR技術檢測miR-21、miR-10a、miR-31、miR-34a、miR-155在慢

7、性期和進展期慢?；颊咧械南鄬Ρ磉_水平。
　　結果：CML患者服用伊馬替尼后進展組的骨髓單個核細胞中miR-21的表達明顯高于慢性期組，miR-10a、miR-31、miR-34a、miR-155在兩組患者骨髓單個核細胞中的表達水平并無顯著差異，無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　結論：miR-21的高表達可能與慢性粒細胞白血病患者服用伊馬替尼期間出現病情進展有關。
　　實驗二
　　目的：探討伊馬替尼治療敏感組和耐

8、藥組患者miR-21的表達水平
　　方法:收集伊馬替尼治療敏感和耐藥的慢?；颊吖撬铇吮竟?7例。制備骨髓單個核細胞并抽提總RNA，利用紫外分光光度儀檢測RNA提取液的濃度和純度，最后利用RT-PCR技術檢測miR-21在敏感組和耐藥組患者中的相對表達水平。
　　結果：CML耐藥組患者骨髓單個核細胞中miR-21的表達明顯高于敏感組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.0001)。
　　結論：miR-21可能與CML患者口服伊馬替

9、尼后出現耐藥存在密切關系。
　　實驗三
　　目的：探討miR-21的靶基因在伊馬替尼治療敏感組和耐藥組患者中的表達水平。
　　方法：收集伊馬替尼治療敏感和耐藥的慢?；颊吖撬铇吮竟?7例。制備骨髓單個核細胞并抽提總RNA，利用紫外分光光度儀檢測RNA提取液的濃度和純度，制備cDNA，最后利用RT-PCR技術檢測PDCD4、PTEN在敏感組和耐藥組患者中的相對表達水平。
　　結果：CML耐藥組患者骨髓單個核細胞中PD