櫛孔扇貝(Chlamys farreri)兩個(gè)卵黃蛋白原轉(zhuǎn)錄本的發(fā)育表達(dá)圖式.pdf

1、卵黃蛋白原(vitellogenin,VTG)是卵黃蛋白(Vn)的前體,能夠?yàn)榘l(fā)育中的胚胎和幼蟲提供營養(yǎng)。對(duì)于卵生動(dòng)物來說,卵黃物質(zhì)的形成與積累是卵子發(fā)生過程中的重要事件。卵黃蛋白是卵黃物質(zhì)的最主要成分,行使著重要的生物學(xué)功能,因此作為卵黃蛋白前體的卵黃蛋白原,具有很高的科研價(jià)值。卵黃蛋白原在脊椎動(dòng)物、昆蟲和甲殼動(dòng)物中已經(jīng)得到廣泛而深入的研究,然而,這些研究?jī)H限于成體特別是性腺發(fā)育周期中,對(duì)個(gè)體發(fā)育過程中卵黃蛋白原的特征報(bào)道甚少。本研究

2、選取我國重要的水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)物種——櫛孔扇貝(Chlamys.farreri)為研究對(duì)象,采用cDNA末端快速擴(kuò)增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技術(shù)獲得了櫛孔扇貝卵黃蛋白原基因的一個(gè)小轉(zhuǎn)錄本的cDNA序列(命名為Cf-vtg2),對(duì)其序列特征進(jìn)行了分析。進(jìn)一步利用Real-Time PCR和原位雜交技術(shù)分析并比較了Cf-vtg2與已獲得的櫛孔扇貝卵巢Cf-vtg1轉(zhuǎn)錄本的個(gè)體發(fā)育表達(dá)圖式以及表達(dá)

3、差異。另外,利用組織學(xué)切片技術(shù)對(duì)櫛孔扇貝的性腺分化進(jìn)行了觀察。
　　 本實(shí)驗(yàn)克隆得到的Cf-vtg2轉(zhuǎn)錄本的cDNA序列長(zhǎng)1719 bp,編碼564個(gè)氨基酸殘基。Cf-VTG2與Cf-VTG1的N末端序列幾乎完全一致,相似性達(dá)99％以上。RT-PCR分析顯示,Cf-vtg1 mRNA僅在卵巢中表達(dá),在肝胰腺中表達(dá)Cf-vtg2小轉(zhuǎn)錄本。Real-Time PCR和原位雜交結(jié)果均顯示,Cf-vtg(包括Cf-vtg1和Cf-vtg

4、2)在櫛孔扇貝的未受精卵、受精卵至D形幼蟲中均有表達(dá),說明其母源性的表達(dá)特點(diǎn)。其中受精卵時(shí)表達(dá)量最高,受精之后表達(dá)量逐漸下降,至D形幼蟲表達(dá)量最低,殼頂幼蟲未能檢測(cè)到目的基因的表達(dá)。當(dāng)個(gè)體發(fā)育至殼高為7mm的幼貝時(shí),Cf-vtg2首先在肝胰腺中檢測(cè)出,并且雌雄肝胰腺中的表達(dá)量沒有顯著性差異。原位雜交結(jié)果顯示Cf-vtg的陽性信號(hào)在未受精卵、受精卵至擔(dān)輪幼蟲期呈均勻分布,D形幼蟲時(shí)信號(hào)開始集中于內(nèi)臟團(tuán)處,殼頂幼蟲時(shí)信號(hào)消失。在精卵巢分化前