櫛孔扇貝(Chlamys farreri)性別分化相關(guān)基因的篩選以及兩個(gè)相關(guān)基因的表達(dá)分析.pdf

1、性別分化是發(fā)育生物學(xué)研究的重要內(nèi)容之一,性別分化相關(guān)基因的研究在脊椎動(dòng)物特別是哺乳動(dòng)物中較為深入,目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了Sry、Sox9、Wnt4等諸多與性別決定和分化有關(guān)的基因；但在無(wú)脊椎動(dòng)物特別是海洋貝類中相關(guān)的研究尚處于起步階段。本研究選取我國(guó)重要的水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)貝類——櫛孔扇貝(Chlamysfarreri)為研究對(duì)象,采用Solexa測(cè)序技術(shù)對(duì)其增殖期精卵巢的差異表達(dá)譜進(jìn)行了分析,獲得了295262個(gè)在精卵巢中差異表達(dá)的Tag,其中1354

2、個(gè)Tag可以在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中得以注釋。選擇其中的5條核酸序列進(jìn)行了半定量RT-PCR驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)solexa測(cè)序結(jié)果與半定量結(jié)果的一致率為40％。
　　 采用RACE技術(shù)對(duì)其中的CL3256序列進(jìn)行全長(zhǎng)cDNA擴(kuò)增,序列比對(duì)初步判定其為核糖體蛋白24基因,定名為Cf-rlp24。該基因全長(zhǎng)cDNA為965 bp,開(kāi)放閱讀框?yàn)?25 bp,編碼175個(gè)氨基酸,該推測(cè)蛋白在不同物種之間同源性很高。Real-time PCR檢測(cè)

3、Cf-rlp24基因在精、卵巢之間以及不同發(fā)育時(shí)期的精巢中均存在表達(dá)差異,其中生長(zhǎng)期和成熟期精巢Cf-rlp24基因的表達(dá)量顯著高于相應(yīng)時(shí)期的卵巢,分別高出2.200±0.446倍和6.036±1.283倍；在精巢的發(fā)育過(guò)程中,該基因的表達(dá)呈逐漸升高的態(tài)勢(shì),至成熟期時(shí)達(dá)最高值,而后迅速回落；但在卵巢的發(fā)育過(guò)程中,始終處于較低的表達(dá)水平,且未見(jiàn)該基因的顯著性表達(dá)差異。我們得出,Cf-rlp24基因參與櫛孔扇貝性腺的發(fā)育,且在精巢發(fā)育中的作

4、用大于卵巢。
　　 本研究我們還采用Real—time PCR技術(shù),分析了櫛孔扇貝卵黃蛋白原基因(Cf-vtg)在兩性性腺發(fā)育周期以及肝胰腺中的表達(dá),得出該基因主要在卵巢中表達(dá),且其表達(dá)量隨著卵巢的發(fā)育成熟而逐漸升高,生長(zhǎng)期和成熟期Cf-vtg基因的表達(dá)量分別為增殖期的1.917±0.035和2.570±0.252倍。休止期卵巢該基因幾乎沒(méi)有表達(dá)。進(jìn)一步我們發(fā)現(xiàn)Cf-vtg基因在肝胰腺中也有少量的表達(dá),其表達(dá)量為增殖期卵巢中的0