Sox2在櫛孔扇貝(Chlamys farreri)早期發(fā)育和性腺年周期發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)分析.pdf

1、SOX2作為一種重要的轉(zhuǎn)錄因子,已經(jīng)在脊椎動(dòng)物中被確定參與胚胎發(fā)生、神經(jīng)發(fā)生、晶狀體發(fā)育以及誘導(dǎo)多能性胚胎干細(xì)胞形成中發(fā)揮重要的功能。本研究以重要的雙殼類海洋經(jīng)濟(jì)物種——櫛孔扇貝(Chlamys farreri)作為研究對(duì)象,通過(guò)RACE技術(shù)克隆獲得了sox2的cDNA全長(zhǎng)序列,并采用半定量RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量 PCR和原位雜交技術(shù)對(duì)其在櫛孔扇貝早期發(fā)育的表達(dá)特征、各組織中的空間表達(dá)以及成體各發(fā)育時(shí)期性腺的表達(dá)定位進(jìn)行了分析,以期

2、為深入探討該基因在扇貝中的作用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。主要結(jié)果如下:
　　櫛孔扇貝sox2(Cf-sox2)的cDNA全長(zhǎng)序列為2194 bp,包含一個(gè)編碼327個(gè)氨基酸的開放閱讀框,并具有SOX家族保守的HMG-box以及SOXB1亞族的SOXp motif結(jié)構(gòu)。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)櫛孔扇貝SOX2中不存在脊椎動(dòng)物SOX2中的兩個(gè)末端結(jié)構(gòu),即在N末端不含有多聚甘氨酸結(jié)構(gòu),在C末端不具有富含絲氨酸的結(jié)構(gòu)。
　　實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR結(jié)果顯示,

3、Cf-sox2是母源性基因;其表達(dá)量在卵裂期胚胎中較受精卵顯著升高,囊胚中達(dá)到最高;原腸胚之后,表達(dá)量顯著下降,并在殼頂幼蟲降到最低。整體原位雜交結(jié)果顯示,陽(yáng)性信號(hào)在原腸胚之前呈彌散分布;進(jìn)入幼蟲時(shí)期后,陽(yáng)性信號(hào)開始集中,擔(dān)輪幼蟲中主要集中在蟲體中部,靠近頂鞭毛的基部以及靠近殼腺原基細(xì)胞周圍;D形幼蟲則集中在內(nèi)臟團(tuán)處;殼頂幼蟲信號(hào)的強(qiáng)度減弱,并且僅在疑似臟神經(jīng)節(jié)和足神經(jīng)節(jié)處有可見的陽(yáng)性信號(hào)。這個(gè)表達(dá)圖式與哺乳動(dòng)物類似,推測(cè)該基因可能參與

4、櫛孔扇貝胚胎和幼蟲組織器官的形成。
　　Cf-sox2 mRNA在增殖期和生長(zhǎng)期成體組織中的半定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,其在精巢、卵巢和閉殼肌中均有表達(dá),其次在生長(zhǎng)期的外套膜和鰓中也檢測(cè)到一定水平的表達(dá);腎和肝胰腺中沒(méi)有可見的表達(dá)。
　　對(duì)櫛孔扇貝成體精巢和卵巢各發(fā)育時(shí)期的Cf-sox2定位檢測(cè)發(fā)現(xiàn),其在各時(shí)期的所有類型的生殖細(xì)胞和濾泡細(xì)胞中均有表達(dá),但信號(hào)強(qiáng)度在細(xì)胞之間存在差異,推測(cè)該基因可能參與成體組織的功能維持和配