溫度和脂多糖對櫛孔扇貝(Chlamys farreri)血細(xì)胞免疫響應(yīng)的影響.pdf

1、本論文研究了不同養(yǎng)殖溫度下,櫛孔扇貝血細(xì)胞數(shù)量、血細(xì)胞吞噬活力的差異;探討了脂多糖刺激的最適濃度;檢測了在同一養(yǎng)殖溫度下,櫛孔扇貝經(jīng)過脂多糖刺激后,其血細(xì)胞數(shù)量、血細(xì)胞呼吸爆發(fā)活力,血細(xì)胞內(nèi)溶菌酶、酚氧化酶活力的變化;深入研究了脂多糖和溫度對櫛孔扇貝血細(xì)胞吞噬活力的聯(lián)合作用,旨在為櫛孔扇貝健康養(yǎng)殖以及血細(xì)胞吞噬作用研究提供參考。本論文主要包括以下三部分:
　　(1)不同飼養(yǎng)溫度下,櫛孔扇貝血細(xì)胞數(shù)量及吞噬活力的差異分析:在不同養(yǎng)殖

2、溫度下(5℃、10℃、15℃、20℃、25℃),用血球計數(shù)板法檢測了扇貝血細(xì)胞數(shù)量的差異,熒光顯微鏡觀察了血細(xì)胞吞噬活力的差異性,發(fā)現(xiàn)較低溫度(5℃、10℃)和較高溫度下(25℃),扇貝血細(xì)胞數(shù)量少,個體間差異較大,血細(xì)胞吞噬熒光微球的能力較弱,單個細(xì)胞只能吞噬1-2個熒光微球,透明細(xì)胞和顆粒細(xì)胞都能吞噬熒光微球。適宜溫度(15℃、20℃)下,血細(xì)胞數(shù)量多,個體間差異小,血細(xì)胞吞噬熒光微球的能力較強,單個細(xì)胞能吞噬1-12個熒光微球。<

3、br>　　(2)脂多糖刺激后,扇貝血細(xì)胞數(shù)量和胞內(nèi)酶活的變化:15℃下,用不同濃度的脂多糖(0.5 mg/ml、1 mg/ml、2 mg/ml、3 mg/ml、4 mg/ml)刺激櫛孔扇貝,觀察扇貝的生長狀態(tài),結(jié)果表明0.5、1和2 mg/ml為脂多糖刺激的適宜范圍。分別用濃度為0.5、1.0和2.0 mg/ml的脂多糖刺激扇貝后,每天測量每個濃度組扇貝血細(xì)胞總數(shù)(THC)、血細(xì)胞呼吸爆發(fā)活力(RBA)、血細(xì)胞內(nèi)溶菌酶(LSM)及酚氧化

4、酶活力(PoA),持續(xù)7天。結(jié)果顯示, THC在0.5、1.0和2.0 mg/ml組均顯著升高,但是1.0 mg/ml組血細(xì)胞升高的持續(xù)時間長。三個濃度組對RBA的激活效果沒有顯著差異。在0.5 mg/ml組中,PoA于第2天達(dá)到峰值2.67±0.19 U/mg protein/min;在1.0 mg/ml組中,其激活持續(xù)時間是從第1天到第4天,于第2天達(dá)到峰值3.86±0.23 U/mg protein/min;在2.0 mg/ml組

5、中于第2天達(dá)到峰值2.11±0.21 U/mg protein/min。0.5 mg/ml實驗組中,血細(xì)胞的LSM活力無顯著變化;1.0和2.0 mg/ml實驗組中,扇貝血細(xì)胞LSM活力在24,48和72 h顯著升高;1.0 mg/ml實驗組中血細(xì)胞LSM活力變化極顯著,在24,48和72 h時,血細(xì)胞LSM活力分別達(dá)到4.86 U/ml、5.17 U/ml、5.56 U/ml,而對照組血細(xì)胞LSM活力僅為2.36 U/ml。綜合考慮,

6、1 mg/ml脂多糖是櫛孔扇貝的最佳刺激濃度。
　　(3)溫度和脂多糖對櫛孔扇貝血細(xì)胞吞噬力的影響:研究櫛孔扇貝在5℃、10℃、15℃、20℃和25℃下,分別注射熒光微球、脂多糖和熒光微球混合液,利用流式細(xì)胞儀測定血細(xì)胞吞噬率,研究水溫和脂多糖對血細(xì)胞吞噬活力的影響。各養(yǎng)殖溫度組血細(xì)胞吞噬率的結(jié)果表明:在5個養(yǎng)殖溫度下,2個處理組均自6h開始扇貝血細(xì)胞內(nèi)即出現(xiàn)吞噬的微球,之后吞噬率開始逐漸上升,直到18-24 h達(dá)到最高峰,隨后逐

7、漸下降。5℃、10℃、15℃、20℃和25℃組,注射熒光微球組血細(xì)胞最大吞噬率分別為8.66±0.26％、14.00±0.22%、16.97±0.55%、25.62±0.88%、8.97±0.25%,注射脂多糖與熒光微球混合液組分別為9.75±0.48%、17.49±0.43%、23.13±0.57%、34.16±0.97%、10.42±0.45%。20℃組血細(xì)胞吞噬率顯著高于其他溫度組,其次是15℃組、10℃組,最低是5℃和25℃組,