櫛孔扇貝(Chlamys farreri)顆粒血細胞發(fā)生及其單克隆抗體與五種雙殼貝類血細胞交叉反應的研究.pdf

1、本論文從櫛孔扇貝(Chlamys farreri)血細胞單克隆抗體庫中篩選出一株能夠特異性識別櫛孔扇貝顆粒血細胞的單克隆抗體,用其作為顆粒血細胞示蹤分子探針,揭示了櫛孔扇貝顆粒血細胞的發(fā)生時間與分布特點,檢測了櫛孔扇貝顆粒血細胞單克隆抗體與五種雙殼貝類血細胞的交叉反應情況,旨在為貝類血細胞的發(fā)生、分化和免疫功能研究積累資料。本論文主要包括以下三部分:
　　1櫛孔扇貝顆粒血細胞單克隆抗體的特性分析分別應用間接免疫熒光法、流式免疫熒光

2、法、免疫電鏡法和免疫組化法,從櫛孔扇貝血細胞單克隆抗體庫中篩選出一株特異性較強的單克隆抗體(單抗)6C6。間接免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn),單抗6C6能特異性的與櫛孔扇貝顆粒血細胞結合,并且其反應為強陽性;流式免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn),單抗6C6的陽性率為59±2.4％,其中陽性透明血細胞(PH)占6±2.3％,陽性顆粒血細胞(PG)占53±2.5％,陽性顆粒血細胞占總陽性血細胞數(shù)的89±2.4％:免疫電鏡檢測發(fā)現(xiàn),膠體金粒子基本呈點狀密集分布在顆粒血細胞

3、的胞質(zhì)顆粒上;免疫組化檢測發(fā)現(xiàn),單抗6C6能特異性識別扇貝組織中的顆粒血細胞,并且與其它組織細胞沒有交叉反應。以上結果表明:單抗6C6可以作為定位櫛孔扇貝顆粒血細胞的特異性分子探針,可以為顆粒血細胞的發(fā)生與分布、血細胞免疫功能等研究提供工具。
　　2櫛孔扇貝顆粒血細胞的發(fā)生與分布分別應用光鏡微分干涉觀察、半薄切片H&E染色法和單克隆抗體的免疫組化法,通過櫛孔扇貝不同時期幼蟲(擔輪幼蟲、D形幼蟲、殼頂幼蟲和匍匐幼蟲)的免疫組化研究發(fā)

4、現(xiàn),櫛孔扇貝顆粒血細胞最早出現(xiàn)在D形幼蟲期,顆粒血細胞為球形或橢球形,直徑為3～5μm,分布于D形幼蟲的面盤基部、消化腺內(nèi)、胃壁和消化道壁周圍:櫛孔扇貝殼項幼蟲外套膜組織內(nèi)的顆粒血細胞散在分布,面盤頂部與食道附近有少量游離顆粒血細胞的存在,面盤基部、消化腺內(nèi)及胃的周圍顆粒血細胞數(shù)量多,相互聚集成簇;櫛孔扇貝匍匐幼蟲的外套膜、鰓、消化腺內(nèi)及消化道、胃周圍等組織器官廣泛分布著大量顆粒血細胞,直徑為4～6μm,顆粒血細胞數(shù)量多,形態(tài)多樣。以上

5、結果表明:櫛孔扇貝顆粒血細胞最早出現(xiàn)在D形幼蟲期,顆粒血細胞分布于幼蟲的面盤基部、消化腺內(nèi)、胃壁和消化道壁周圍等與攝食、運輸和消化功能相關的組織器官中,可以推測顆粒血細胞的這種分布特點與扇貝早期幼蟲不完善的免疫防御系統(tǒng)有關。
　　3櫛孔扇貝顆粒血細胞單克隆抗體與五種雙殼貝類血細胞的交叉反應分別應用斑點印跡法、間接免疫熒光法和流式免疫熒光法,研究櫛孔扇貝顆粒血細胞單克隆抗體與五種雙殼貝類,包括海灣扇貝、蝦夷扇貝、太平洋牡蠣、紫貽貝和

6、毛蚶血細胞的交叉反應情況。斑點印跡法檢測發(fā)現(xiàn),單抗6C6與海灣扇貝、蝦夷扇貝、太平洋牡蠣血細胞反應為陽性,與紫貽貝、毛蚶血細胞為陰性反應;間接免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn),單抗6C6可以和海灣扇貝、蝦夷扇貝、太平洋牡蠣顆粒血細胞發(fā)生特異性的結合,呈現(xiàn)陽性反應,但與這三種貝類的透明血細胞以及紫貽貝、毛蚶血細胞未發(fā)生特異性結合;流式免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn),單抗6C6能特異性識別海灣扇貝、蝦夷扇貝和太平洋牡蠣的顆粒血細胞,其陽性率分別為為15±2.5％,12±