豬IgGⅡ類Fc受體（FcγRⅡ）基因克隆與表達.pdf

1、Fc受體(FcR)為特異親和免疫球蛋白(Ig)Fc片段的細胞表面分子，廣泛表達于免疫輔助細胞和效應細胞，具有許多重要的生理功能，是體液免疫與細胞免疫的聯(lián)系紐帶，在機體免疫調節(jié)中起關鍵作用。目前僅人和小鼠的三類IgGFc受體(FcγRⅠ、FcγRⅡ和FcγⅢ)研究的較為深入。 本研究利用生物信息學和分子生物學技術，首次克隆了豬IgGⅡ類Fc受體cDNA，并通過玫瑰花環(huán)形成實驗(EA)進一步鑒定了配體親和特性。即用人CD32氨基酸序

2、列檢索NCBI的EST數(shù)據(jù)庫(包括除人和老鼠以外的所有物種核苷酸序列)(tBLASTn)，發(fā)現(xiàn)了一個高同源序列。再采用cDNA快速擴增技術(RapidamplificationofcDNAends，RACE)從豬外周血白細胞cDNA中分別擴增到了3’端、5’端以及全長cDNA序列，獲得了豬IgGⅡ類Fc受體(FcγRⅡ)基因，命名為swFcγRⅡ。swFcγRⅡ全長1488bp，編碼297個氨基酸的跨膜糖蛋白，包括兩個Ig樣結構域，胞內

3、區(qū)含有基于酪氨酸的受體抑制基序(immunoreceptortyrosine-basedinhibitorymotif，ITIM)。swFcγRⅡ氨基酸序列分別與人和老鼠的同源性為67％和52％。隨后，RT-PCR檢測到了swFcγRⅡmRNA在外周血白細胞、肝臟、肺臟和腸系膜淋巴結有較高表達。 將swFcγRⅡORF基因亞克隆到真核表達載體pcDNA構建成重組質粒pcDNA/swFcγRⅡ，再用脂質體法轉染COS-7細胞，用玫