B細(xì)胞刺激因子受體(BAFF一R)的基因克隆、表達(dá)與功能研究.pdf

1、B淋巴細(xì)胞刺激因子(BLyS)能調(diào)節(jié)B細(xì)胞的存活、增殖、發(fā)育和分化。但是BLyS過量表達(dá)會(huì)促進(jìn)B細(xì)胞的惡性增殖，導(dǎo)致自身免疫性疾病的發(fā)生。BAFF-R是BLyS的專一受體，對(duì)于BLyS介導(dǎo)的B細(xì)胞存活和成熟是必要的。BAFF-R胞外區(qū)與BLyS配體相結(jié)合，然后在細(xì)胞內(nèi)特異地與下游接頭分子TRAF3相結(jié)合，最終激活非經(jīng)典的NF-K B信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，從而調(diào)節(jié)B細(xì)胞的一系列功能。而且外源BLyS受體具有清除體內(nèi)過量BLyS的潛力，所以BAFF

2、-R的功能以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑已經(jīng)成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。
　　本論文對(duì)BAFF-R的功能進(jìn)行了以下兩方面的研究：
　　1．釣取了BAFF-R的胞外區(qū)cDNA序列，將BAFF-R胞外區(qū)以GST融合蛋白的形式進(jìn)行表達(dá)；并且對(duì)表達(dá)宿主菌和誘導(dǎo)溫度進(jìn)行了優(yōu)化；然后用Western-Blotting鑒定了所表達(dá)蛋白是目的蛋白；隨后用親和層析的方法純化了BAFF-R胞外區(qū)蛋白，其純度在85％以上；最后用MTT的方法檢測(cè)到BAFF-R胞外區(qū)蛋

3、白對(duì)BLyS促RA-MOS細(xì)胞的增殖有抑制作用。
　　2．釣取了BAFF-R胞內(nèi)區(qū)和TRAF3-C(TRAF3 C端穩(wěn)定區(qū))的cDNA序列，然后利用酵母雙雜交的方法研究BAFF-R胞內(nèi)區(qū)和TRAF3相互作用的分子結(jié)合域。將BAFF-R胞內(nèi)區(qū)構(gòu)建到BD質(zhì)粒上，將TRAF3-C構(gòu)建到AD質(zhì)粒上，兩者共轉(zhuǎn)酵母后有強(qiáng)烈的相互作用。然后構(gòu)建了11個(gè)TRAF3的突變體，分別在TRAF3的N端和C端進(jìn)行缺失突變，隨后與 BAFF-R胞內(nèi)區(qū)共轉(zhuǎn)酵