FcαR內吞及脫落機制研究.pdf

1、本論文分為兩部分，第一部分研究了FeαR（CD89）的內吞機制，第二部分研究了FeαR的脫落機制。另外，2006年3月至2007年2月期間，本人參與了本課題組尹娜博士的研究課題，這部分研究內容和結果未納入本論文，具體內容詳見尹娜博士的博士論文以及發(fā)表文章。
　　 第一部分
　　 FcαR是IgA的Fc受體，在IgA介導的免疫反應中發(fā)揮著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，IgA以及IgA免疫復合物結合FcαR后，會被FcαR迅速內吞入細

2、胞內。但是，F(xiàn)cαR介導IgA和IgA免疫復合物內吞的機制還不清楚。在本研究中，我們使用天然表達FcαR的U937細胞以及轉染的CHO、COS-7和Hela細胞，系統(tǒng)性地研究了FcαR的內吞機制。通過使用能特異性抑制不同內吞途徑的化學抑制劑、過表達Eps15負顯性突變體以及運用RNA干擾技術抑制內源性籠型蛋白重鏈（CHC）的表達水平，我們證明了FcαR是通過籠型蛋白途徑內吞的。內吞后FcαR進入Rab5以及Rab11陽性的內體中。但是，

3、過表達Rab5的負顯性突變體并不能抑制FcαR的內吞。同時，通過過表達Dynamin的負顯性突變體，我們發(fā)現(xiàn)FcαR內吞依賴于Dynamin。我們還研究了FcαR的內吞基序，但意外地發(fā)現(xiàn)FcαR的內吞序列并不存在于FcαR的胞內區(qū)。綜上所述，我們證明了FcαR內吞依賴于籠型蛋白和Dynamin，但不受Rab5調控，而且FcαR的內吞基序不在膜內區(qū)。
　　 第二部分
　　 FcαR在IgA介導的免疫反應中發(fā)揮著重要作用。研

4、究發(fā)現(xiàn)，人血清和表達FcαR細胞的培養(yǎng)液上清中存在著可溶性的FcαR（sFcαR）。進一步研究證實，sFcαR是FcαR的膜外區(qū)被酶切后脫落產生的，即所謂的受體脫落。但是，F(xiàn)cαR脫落的具體機制目前還不清楚。因此，我們研究了FcαR的脫落機制并找到了酶切FcαR膜外區(qū)產生sFcαR的蛋白酶。在使用化學抑制劑進行的實驗中，EDTA、EGTA和廣譜金屬蛋白酶抑制GM6001能顯著抑制FcαR脫落，表明FcαR是被某一種或幾種金屬蛋白酶酶切的

5、。在293T細胞中過表達.ADAM（adisintegrinandmetalloproteinase）10和ADAM17的負顯性突變體能明顯抑制FcαR脫落，表明FcαR脫落與這兩種金屬蛋白酶有關。最后，通過RNA干擾技術在天然表達FcαR的U937細胞中抑制內源性ADAM10和ADAM17的表達水平，我們證明了ADAM10和ADAM17都參與了FcαR脫落。該研究鑒定出了導致FcαR脫落的蛋白酶，闡明了sFcαR產生的分子機制，這有助