布地奈德聯(lián)合孟魯司特對哮喘小鼠氣道重塑的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的:探討布地奈德聯(lián)合孟魯司特對哮喘小鼠模型氣道重塑的影響及骨橋蛋白(osteopontin,OPN)和轉(zhuǎn)化生長因子β1(TransformingGrowth Factor-β1,TGF-β1)在哮喘氣道重塑中的作用。
　　 方法:健康6～8周齡雄性BALB/c小鼠40只隨機(jī)分為5組,每組8只小鼠:(1)空白對照組,致敏及激發(fā)均用生理鹽水;(2)哮喘模型組,小鼠予以腹腔注射卵清蛋白和氫氧化鋁混懸液致敏,之后以卵清蛋白溶液霧化吸入

2、激發(fā);(3)布地奈德治療組(BUD組),致敏后每次激發(fā)前30min予以BUD(1mg/次)霧化吸入;(4)孟魯司特治療組(MK組),每次激發(fā)前30min予以MK(10mg/kg)灌胃;(5)布地奈德聯(lián)合孟魯司特治療組(BUD+MK組),每次激發(fā)前30min予以BUD(1mg/次)霧化吸入及MK(10mg/kg)灌胃。末次激發(fā)24h后通過眼球取血,離心取血清用ELISA方法測定OPN和TGF-β1,然后取支氣管肺泡灌洗液(BALF)進(jìn)行嗜

3、酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù),取肺組織HE染色行組織學(xué)檢查、OPN免疫組化及陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)、Masson染色測定膠原沉積。
　　 結(jié)果:(1)BALF中嗜酸粒細(xì)胞數(shù):與對照組(4.12±1.35×106/L)相比模型組(22.3±1.95×106/L)嗜酸粒細(xì)胞增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與模型組相比BUD組(14.57±1.62×106/L)和MK組(16.89±1.34×106/L)嗜酸粒細(xì)胞減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)

4、;BUD+MK組(10.43±1.13×106/L)與MK組及BUD相比嗜酸粒細(xì)胞均減少,但與MK組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),而與BUD組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。(2)HE染色:與對照組相比,模型組肺組織切片可見嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤,而BUD組、MK組、BUD+MK組經(jīng)治療后肺組織炎性病變較模型組明顯減輕;(3)免疫組化檢測OPN陽性細(xì)胞數(shù)(400倍光鏡下計(jì)數(shù)5個(gè)視野中OPN陽性細(xì)胞數(shù)與視野總細(xì)

5、胞數(shù)之比,再取平均值):對照組(5.48±1.61％)、模型組(30.78±3.54％)、MK組(27.02±3.43％)、BUD組(28.12±3.49％)及MK+BUD組(26.04±3.30％)。與對照組相比模型組陽性細(xì)胞數(shù)增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與模型組相比MK組、BUD組和MK+BUD組相比陽性細(xì)胞數(shù)均減少,MK組和BUD組與模型組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),而MK+BUD組與模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

6、義(P＜0.05)。(4)血清細(xì)胞因子含量:①OPN:與對照組(1147.59±225.66pg/ml)相比模型組小鼠血清OPN含量(4222.37±707.28pg/ml)增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與模型組相比BUD組(1762.37±354.47pg/ml)和MK組(2150.46±423.77pg/ml)均減少,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),BUD+MK組(1433.912±235.67pg/ml)與模型組、B

7、UD組、MK組相比均減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意(P＜0.05)。②TGF-β1:與對照組(30.63±5.17pg/ml)相比模型組小鼠血清TGF-β1含量(102.83±21.77pg/ml)增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);BUD組(68.32±20.98pg/ml)和MK組(60.21±14.20pg/ml)與模型組相比血清TGF-β1含量均減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);BUD+MK組(44.12±10.12pg/ml)

8、與模型組、BUD組和MK組相比均減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。③模型組TGF-β1與OPN的相關(guān)性:OPN的含量與TGF-β1的含量呈直線正相關(guān)(r=0.927,P＜0.01);(5)Masson染色:①與對照組(1.68±0.28)相比模型組(5.12±0.42)的膠原表達(dá)量增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);BUD組(2.94±0.32)、MK組(3.05±0.35)和BUD+MK組(2.48±0.25)的膠原表達(dá)量較

9、模型組減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);BUD+MK組與BUD組、MK組比較膠原表達(dá)量減少,差,異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。②模型組OPN的含量與膠原表達(dá)量呈直線正相關(guān)(r=0.929,P＜0.01)。
　　 結(jié)論:1.OVA激發(fā)2周后,小鼠氣道出現(xiàn)了氣道重塑。2.OPN和TGF-β1參與氣道重塑過程,兩者呈直線正相關(guān);3.布地奈德及孟魯司特治療哮喘可能通過減少OPN和TGF-β1的表達(dá)而影響氣道重塑。4.布地奈德聯(lián)合