布地奈德對(duì)哮喘小鼠氣道上皮occludin和E-cadherin表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察哮喘小鼠氣道上皮閉鎖蛋白(occludin)和E-鈣粘蛋白(E-cadherin)的表達(dá)和布地奈德(BUD)對(duì)其表達(dá)的影響，探討occludin和E-cadherin在哮喘發(fā)病中的作用及糖皮質(zhì)激素治療哮喘的機(jī)制。
　　方法:將24只SPF級(jí)雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分成哮喘組、布地奈德治療組(BUD組)及對(duì)照組，每組8只。哮喘組:0、7、14d腹腔注射新鮮配制的卵蛋白(OVA)+氫氧化鋁的生理鹽水(NS)混懸溶液0.2 m

2、l[含OVA20μg，氫氧化鋁2 mg]致敏，第21d起給予1％OVA霧化吸入激發(fā)30 min，1次/d，連續(xù)14d，每次激發(fā)前1h霧化吸入NS2 ml。BUD組:致敏及激發(fā)同哮喘組，但每次激發(fā)前1h霧化吸入布地奈德混懸液1 mg(2 ml)。對(duì)照組:用相同的方法以NS代替OVA進(jìn)行致敏和激發(fā)。小鼠末次激發(fā)24 h后處死，蘇木精-伊紅(HE)染色觀察支氣管肺組織病理學(xué)的改變;電鏡觀察氣道上皮的超微結(jié)構(gòu);過(guò)碘酸-雪夫氏染色(PAS)法觀察

3、氣道黏膜上皮層杯狀細(xì)胞增生和黏液分泌情況;支氣管肺泡灌洗液(BALF)行嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù);免疫組織化學(xué)染色法觀察氣道上皮occludin和E-cadherin的表達(dá);實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-timePCR)檢測(cè)occludin mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:(1)HE染色:哮喘組小鼠氣道上皮細(xì)胞壞死脫落，支氣管黏膜層大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，黏液腺增生，基底膜增厚，氣道管腔狹窄，部分管腔內(nèi)可見(jiàn)黏液栓;BUD組上述病理改變較哮喘組減輕;

4、對(duì)照組未見(jiàn)上述病理改變。3組小鼠的Underwood肺組織病理學(xué)評(píng)分分別為哮喘組(4.1±0.675)、BUD組(2.3±0.736)和對(duì)照組(0.5±0.506)，三組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，BUD組評(píng)分比哮喘組低（P＜0.05），但高于對(duì)照組（P＜0.05）。(2)電鏡:哮喘組氣道上皮細(xì)胞纖毛明顯脫落、變稀、變短，微絨毛減少。上皮細(xì)胞間的連接結(jié)構(gòu)有松裂或缺失，細(xì)胞間隙增寬，基底膜不連續(xù)，膠原纖維增多。BUD組上述表現(xiàn)

5、較哮喘組有所減輕。對(duì)照組未見(jiàn)上述改變。(3) PAS染色:與對(duì)照組(0.250±0.463)比較，哮喘組氣道上皮PAS染色陽(yáng)性的杯狀細(xì)胞數(shù)(3.375±0.744)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);與哮喘組比較，BUD組杯狀細(xì)胞數(shù)(1.625±0.518)增生減少，但仍高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。(4)BALF中嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)計(jì)數(shù):與對(duì)照組(0.750±0.707)比較，哮喘組EOS數(shù)量(20.875

6、±1.808)明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);與哮喘組比較，BUD組EOS數(shù)量(10.625±1.302)減少，但仍高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。(5)免疫組織化學(xué)染色:對(duì)照組小鼠occludin、E-cadherin主要在氣道上皮細(xì)胞表面和細(xì)胞與細(xì)胞間的包膜上呈連續(xù)的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，而B(niǎo)UD組表達(dá)強(qiáng)度減弱，為不連續(xù)表達(dá)，但仍比哮喘組表達(dá)明顯。哮喘組occludin的平均光密度值(OD值)(0.126±0.03

7、2)明顯低于對(duì)照組(0.652±0.313)及BUD組(0.337±0.028)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);與對(duì)照組比較，BUD組OD值仍減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。哮喘組E-cadherin的OD值(0.173±0.043)低于對(duì)照組(0.656±0.068)及BUD組(0.288±0.049)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，BUD組的OD值仍較對(duì)照組低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。(6)Real-

8、time PCR:三組小鼠支氣管肺組織的occludin mRNA相對(duì)含量分別為(7.200±4.959)、(3.127±2.030)、(4.772±1.848)，三組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1.960，P＞0.05)。 結(jié)論:(1)成功建立了BALB/c小鼠哮喘模型;(2)哮喘小鼠存在氣道炎癥和氣道上皮連接結(jié)構(gòu)的損傷;(3)哮喘小鼠氣道上皮occludin和E-cadherin的表達(dá)降低，可能參與了哮喘的發(fā)病過(guò)程;(4)布