布地奈德對(duì)哮喘小鼠作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 研究布地奈德(Budesonide,BUD)對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥、氣道重塑和肺表面活性物質(zhì)系統(tǒng)的影響，分析經(jīng)布地奈德干預(yù)后哮喘小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β(transforming growthfactor β，TGFβ)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的變化、TGFβ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與哮喘小鼠氣道炎癥、氣道重塑、肺表面活性物質(zhì)系統(tǒng)的相互關(guān)系，探討布地奈德在哮喘治療中的作用機(jī)制。 方法： 雌性昆明小鼠40只隨機(jī)分為4組，每組10只。1、哮喘

2、模型組(A組)：昆明小鼠分別于第1、14天腹腔注射以生理鹽水(NS)溶解的卵蛋白(ovalbumin，OVA)50ug和氫氧化鋁1mg混懸液0.2ml致敏，第21天予以1％卵蛋白5ml霧化吸入激發(fā)，每日一次，每次30分鐘，吸入14天。2、治療對(duì)照組(B組)：致敏和激發(fā)方法同哮喘模型組，每次激發(fā)前1小時(shí)吸入NS 5ml，每日一次，每次30分鐘，吸入14天。3、BUD治療組(C組)：致敏和激發(fā)方法同哮喘模型組，每次激發(fā)前1小時(shí)吸入NS溶解的

3、BUD霧化液5ml(含BUD 1mg)，每日一次，每次30分鐘，吸入14天。4、正常對(duì)照組(D組)：昆明小鼠分別于第1、14天腹腔注射NS 0.2ml，第2l天予以NS 5ml霧化吸入，每日一次，每次30分鐘，吸入14天。各組小鼠于末次吸入24小時(shí)后斷頸處死，采集標(biāo)本。采用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定小鼠支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)TGF-β<,1>、IL-12、IL-13的含量。

4、取小鼠肺組織行蘇木素-伊紅(HE)染色，過碘酸．雪呋(PAS)染色，Van Gieson(VG)染色，計(jì)算機(jī)圖像分析測(cè)定小鼠肺組織氣道周圍單位面積內(nèi)嗜酸性細(xì)胞個(gè)數(shù)表示氣道周圍嗜酸性細(xì)胞浸潤情況、單位基底膜長度PAS染色陽性面積表示氣道黏液分泌情況、單位基底膜長度VG染色陽性面積表示氣道周圍膠原增生情況。采用免疫組化圖像分析測(cè)定小鼠肺組織樹突狀細(xì)胞(dendritic cells,DC)，TGF-β<,1>、TGFβ受體I、TGFβ受體Ⅱ

5、、Smad2/3、Smad4、Smad7．以及肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白(surfactant associatedproteins,SP)sP-A、SP-B的表達(dá)。透射電鏡下觀察肺泡Ⅱ型細(xì)胞形態(tài)。 結(jié)果: 1、A組小鼠氣道嗜酸性細(xì)胞浸潤、黏液分泌、樹突狀細(xì)胞表達(dá)較D組增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與B組小鼠比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。C組抑制了致敏小鼠OVA激發(fā)后引起的氣道周圍嗜酸性細(xì)胞明顯浸潤、氣道黏液分泌亢進(jìn)、氣道周圍樹突狀細(xì)胞增

6、多，與A組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2、A組小鼠與B組比較，BALF中IL-12、IL-13、TGF-β<,1>的含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A組小鼠與D組小鼠比較，BALF中FGF-β<,1>和IL-13升高，而IL-12降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，C組抑制了致敏小鼠OVA激發(fā)后引起的BALF中IL-13的升高，與A組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但未能抑制BALF中TGF-β<,1>的升高以及IL-12的降低，與A組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

7、 3、A組小鼠氣道膠原增多、TGF-β<,1>表達(dá)增多，與D組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與B組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。C組抑制了致敏小鼠OVA激發(fā)后引起的氣道壁膠原增多，與A組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但未能抑制氣道過多的TGF=β<,1>表達(dá)，與A組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；C組膠原增生較D組增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A組氣道壁膠原增生程度與TGF-β<,1>的表達(dá)呈正相關(guān)。 4、A、B組小鼠氣道TGFβ/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)

8、差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。C組下調(diào)了致敏小鼠OVA激發(fā)后引起的氣道過多的TGFβ受體I的表達(dá)，同時(shí)上調(diào)了Smad7的表達(dá)，與A組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；對(duì)于TGFp受體Ⅱ、Smad2/3、Smad4的表達(dá)，C組與A組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A組氣道壁膠原增生程度與TGFβ受體I的表達(dá)呈正相關(guān)，與Smad7的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。 5、A、B組小鼠肺泡上皮SP-A、SP-B的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A、C組小鼠肺泡上皮SP-A、SP-B的表達(dá)較D組減少

9、，與D組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。C組肺泡上皮SP-A、SP-B的表達(dá)較A組增多，與A組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。A組小鼠肺泡上皮SP-A、SP-B的表達(dá)與氣道周圍TGF-β<,1>、rGFp受體I的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與Smad7的表達(dá)呈正相關(guān)。 6、通過透射電鏡觀察，A、B組小鼠可見肺泡Ⅱ型細(xì)胞板層小體和線粒體較少，而且有明顯排空和空泡化改變；C組肺泡Ⅱ型細(xì)胞板層小體和線粒體較A組增多，排空和空泡化改變減輕；D組顯示肺泡Ⅱ型細(xì)胞含豐富的板

10、層小體和線粒體，結(jié)構(gòu)完整，無排空和空泡化改變。 結(jié)論： 1、布地奈德通過部分抑制哮喘小鼠IL-12/IL-13比例失衡調(diào)節(jié)哮喘Th1/Th2細(xì)胞平衡，并可抑制哮喘小鼠肺組織增多的嗜酸粒細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和粘液分泌發(fā)揮其抗氣道炎癥作用，布地奈德不能抑制哮喘小鼠肺組織過高的TGF-β<,1>的表達(dá)。 2、布地奈德可通過下調(diào)哮喘小鼠氣道TGFβ受體I的表達(dá)和上調(diào)Smad7的表達(dá)抑制哮喘小鼠活化的TGFβ/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)