b-FGF、NF-κB在哮喘大鼠氣道重塑中的表達及布地奈德的干預作用.pdf

1、支氣管哮喘(bronchial asthma)是一種以氣道慢性炎癥、氣道高反應性及氣道重塑為基本病理特征的慢性疾病。氣道重塑(airway remodeling)是以氣道平滑肌增生肥大、基底膜增厚和上皮下纖維化為基本的病理改變,是不可逆性氣道阻塞和持續(xù)性氣道高反應的重要病理基礎。哮喘氣道重塑的發(fā)生機制比較復雜,目前尚未完全清楚。
　　因此研究哮喘氣道重塑的病理特征及發(fā)生機制,尋找有效的治療方法具有重要的意義。堿性成纖維細胞生長因子

2、(basic fibroblast growthfactor,b-FGF)是一種具有廣泛生物學活性的肽類生長因子,具有廣泛的細胞增殖效應及誘導血管生成等作用。核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)是一種廣泛存在體內(nèi)的多種細胞的核轉(zhuǎn)錄因子,可以通過調(diào)節(jié)多種因子如生長因子、細胞因子、炎性介質(zhì)、趨化因子等的生成和活化而致氣道重構(gòu)。本實驗旨在通過建立大鼠的哮喘氣道重塑模型,研究b-FGF及NF-κ3在大鼠肺內(nèi)的表達以及二

3、者在哮喘氣道重塑的發(fā)生機制中的作用,并通過應用布地奈德進行干預,為哮喘的早期干預及治療提供理論依據(jù)。
　　材料與方法：
　　1.對象和模型制備方法健康雄性清潔級SD大鼠45只,體重(200±10)g,6~7周齡,隨機分為三組:正常對照組(A組)、哮喘模型組(B組)、布地奈德干預組(C組)。制備方法:第一天B組和C組每只大鼠分別腹腔注射1ml10％卵蛋白混懸液(內(nèi)含1ml生理鹽水,100mg氫氧化鋁,100mg卵蛋白)進行致敏

4、,A組用生理鹽水代替卵蛋白,第8天再重復一次;第15天B組和C組開始用卵蛋白激發(fā),將大鼠置于特制密閉玻璃容器中,用壓縮霧化器噴入1％卵蛋白液,隔日一次,每次20分鐘,共激發(fā)21次,A組用生理鹽水代替,C組于霧化卵蛋白液半小時后給予霧化吸入布地奈德液進行干預。
　　2.標本采集各組大鼠分別于末次激發(fā)后24小時內(nèi)用苯巴比妥麻醉(100mg/只)下開胸,經(jīng)右心室插管至肺動脈,用生理鹽水快速灌洗后,取右肺中葉,置于10％多聚甲醛內(nèi)固定24

5、h,酒精梯度脫水,石蠟包埋,選取垂直、平行氣道取材,做厚度為5μm的切片,分別做蘇木素—伊紅(HE)染色和免疫組織化學染色。
　　3.平滑肌厚度及氣道上皮厚度測量采用計算機圖像分析系統(tǒng)進行分析處理,在高倍鏡下.(×400)找相同級別的兩個完整的支氣管橫斷面,測量平滑肌厚度和氣道上皮厚度,分別取其平均值做為最后的測定結(jié)果,單位μm。
　　4.b-FGF、NF-κB表達水平的測定應用計算機圖像病理分析系統(tǒng),在高倍鏡(×400)下

6、每張切片隨機選取5個具有代表性的視野,分別選取陽性區(qū)測量其灰度值,計算其平均灰度值做為最后的測定結(jié)果。
　　5.統(tǒng)計學分析采用SPSS15.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學處理,結(jié)果以均數(shù)±標準差((?)±s)表示,各組樣本均數(shù)經(jīng)過方差齊性檢驗后,采用單因素方差分析,組間進一步兩兩比較用LSD法;各因素之間的相關(guān)性采用直線相關(guān)分析。以α=0.05為檢驗水準,P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：
　　1.肺大體標本觀察各

7、組大鼠肺臟切面均無肺實質(zhì)出血和化膿性病灶。哮喘組大鼠肺標本與對照組相比體積增加明顯,充血明顯,可見間質(zhì)內(nèi)有少量的纖維樣囊腫。干預組大鼠肺標本上述改變較哮喘組顯著減輕。
　　2.HE染色哮喘組大鼠肺組織HE染色可見支氣管上皮脫落,粘膜中斷、皺襞增加,氣道壁厚度增加,管腔狹窄,粘膜下及管壁周圍可見大量炎癥細胞(以淋巴細胞和嗜酸性粒細胞為主)。干預組大鼠氣道上皮細胞偶有脫落,粘膜相對光滑完整。氣道壁增厚及炎癥細胞浸潤情況均較哮喘組明顯減

8、輕。對照組大鼠肺組織幾乎無上述病理改變。
　　3.免疫組化染色
　　3.1氣道平滑肌厚度及氣道上皮厚度的比較:哮喘組大鼠氣道上皮厚度和平滑肌層厚度與對照組相比明顯增加,經(jīng)布地奈德干預后氣道上皮厚度和平滑肌層厚度與哮喘組大鼠比較明顯降低,P<0.05。
　　3.2 b-FGF在大鼠氣道壁的表達:b-FGF在大鼠肺內(nèi)主要表達于氣道上皮細胞、平滑肌細胞、成纖維細胞和血管壁平滑肌細胞;b-FGF在哮喘組的表達(126.21±6

9、.46)顯著高于對照組(106.05±7.67),P<0.05;經(jīng)布地奈德干預后的大鼠肺內(nèi)的表達(111.61±5.52)明顯低于哮喘組大鼠,P<0.05。
　　3.3 NF-κB在大鼠氣道壁的表達:NF-κB在大鼠肺內(nèi)主要表達于氣道上皮細胞、氣道平滑肌細胞和血管內(nèi)皮細胞。NF-κB在哮喘組的表達(134.15±9.42)顯著高于對照組(102.51±6.77),P<0.05;干預組大鼠肺內(nèi)的表達(110.65±8.71)明顯低于

10、哮喘組大鼠,P<0.05。
　　3.4相關(guān)性分析:哮喘組大鼠肺內(nèi)b-FGF與NF-κB的表達呈正相關(guān)(r=0.531,P<0.05)。哮喘大鼠肺內(nèi)b-FGF與NF-κB表達與氣管上皮的厚度及平滑肌厚度呈正相關(guān)性(rb-FGF=0.574,rNF-κB=0.711,P<0.05),與氣道上皮厚度呈正相關(guān)性(rb-FGF=0.601,rNF-κB=0.730,P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.堿性成纖維細胞生長因子和核