Galectin-8在哮喘大鼠氣道重塑中的作用及姜黃素的干預(yù).pdf

1、目的：(1)建立大鼠慢性哮喘模型，觀察哮喘大鼠半乳糖凝集素-8(Galectin-8)及其mRNA、P-ERK1/2及其mRNA在氣道、肺組織中的表達(dá)情況。(2)探討Galectin-8及下游因子ERK1/2與哮喘氣道炎癥及氣道重塑的關(guān)系。(3)研究Galectin-8抑制劑渥曼青霉素及姜黃素對(duì)哮喘大鼠氣道炎癥、氣道重塑及對(duì)肺組織中Galectin-8、ERK1/2表達(dá)的影響。(4)觀察地塞米松對(duì)氣道重塑和肺組織Galectin-8、E

2、RK1/2表達(dá)的影響。
　　 方法：SPF級(jí)雄性SD大鼠59只，4-6w，100-120g，用卵清白蛋白(OVA)致敏與激發(fā)，建立大鼠哮喘氣道重塑模型。實(shí)驗(yàn)分為正常組(N組，9只)、哮喘組(A組，10只)、地塞米松組(M組，10只)、渥曼青霉素組(W組，10只)、姜黃素組(C組，10只)及玉米油組（O組，10只），正常組用生理鹽水，模型組及各治療組用OVA/Al(OH)3混合凝膠于第1、8天腹腔注射(i．p)致敏，第15天開(kāi)始激

3、發(fā)，每周三次，每次30分鐘，連續(xù)8周。C組激發(fā)前半小時(shí)，予腹腔注射姜黃素100mg/kg;W組激發(fā)前半小時(shí)予腹腔注射渥曼青霉素15ug/kg;O組激發(fā)前半小時(shí)予腹腔注射玉米油4ml/kg;M組激發(fā)前半小時(shí)予腹腔注射地塞米松0.5mg/kg，其余兩組以生理鹽水代替。末次激發(fā)后24小時(shí)內(nèi)處死大鼠用固相夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測(cè)血清及支氣管肺泡灌洗(BALF)液中ICAM-1水平；對(duì)BALF液行細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)，BALF沉渣涂片作

4、細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)；光鏡、電鏡觀察肺組織病理變化：圖像分析技術(shù)測(cè)定肺內(nèi)支氣管壁厚度(Wat)及平滑肌厚度(Wam)等重塑指標(biāo)；免疫組化、RT-PCR法測(cè)Galectin-8、P-ERK1/2的表達(dá)情況等。
　　 結(jié)果：1．光鏡：N組支氣管和血管周?chē)匆?jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，支氣管平滑肌未出現(xiàn)增厚。A組可見(jiàn)支氣管和血管周?chē)仔约?xì)胞浸潤(rùn)，以淋巴細(xì)胞、EOS、中性粒細(xì)胞為主，氣道上皮斷裂，管腔內(nèi)可見(jiàn)粘液栓，基底膜增厚，支氣管壁增厚、膠原沉積等。治療

5、組上述改變程度不一，均較A組減輕。
　　 2.電鏡：電鏡下N組顯示正常的肺泡隔和肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)板層體致密、豐富，支氣管纖毛上皮排列整齊。A組肺泡隔明顯增厚，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞腫脹，出現(xiàn)板層小體和線粒體空泡化，纖毛排列稀疏，基底膜增厚，膠原沉積等。治療組上述改變程度不一，均較A組輕。
　　 3．細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(lèi)計(jì)數(shù)：A組BALF細(xì)胞總數(shù)[(3.65±0.37)×106/L]、嗜酸細(xì)胞百分比[(7.32±1.62)％]

6、均顯著高N組[分別為(0.79±0.30)×106/L、(2.3±0.94)％](均P＜O.01)；M組[分別為(1.73±0.15)×106/L、(4.92±0.82)％]、W組[分別為(1.77±0.17)×106/L、(2.86±0.31)％]、C組[分別為(2.29±0.27)×106/L、(4.68±0.57)％]，其中細(xì)胞總數(shù)均低于A組但仍高于N組(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 4．支氣管壁厚度(Wat)和支

7、氣管平滑肌厚度（Wam）：A組Wat及Wam均較同時(shí)期N組增加：A組[(74.75±5.59)μm2/μm、(40.03±4.25)μm2/μm]均較N組[(34.52±1.50)μm2/μm、(13.21±1.26)μm2/μm]增加（均P＜0.01）；治療組Wat及Wam比較：M組[(55.04±6.38)μm2/μm、(21.75±4.13)μm2/μm]、W組[(60.27±4.95)μm2/μm、(24.15±4.57)μm2

8、/μm]、C組[(66.81±5.02)μm2/μm、(34.67±1.79)μm2/μm]均較A低（P＜0.05或P＜0.01），但仍高于N組(均P＜0.01)。
　　 5．血清、BALF中ICAM-1含量：A組血清ICAM-1濃度[(70.01±5.254)pg/ml]及BALF液ICAM-1濃度[(49.89±2.113)pg/ml]均高于N組[分別為(38.16±1.746)pg/ml、(28.03±1.983)pg/m

9、l](均P＜0.01),M組[分別為(61.79±4.158)pg/ml、(32.91±1.430)pg/ml]、W組[分別為(62.91±4.432)pg/ml、(37.11±1.199)pg/ml]和C組[分別為(63.60±2.516)pg/ml、(38.01±0.970)pg/ml]均顯著低于A組(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 6．免疫組化檢測(cè)肺組織Galectin-8、p-ERK1/2蛋白表達(dá)：二者表達(dá)呈明顯一

10、致性，平均吸光度值(MOD)A組高于同時(shí)期N組：[分別為(0.91±0.21)和(0.93±0.18)、(0.19±0.02)和(0.18±0.01)](均P＜0.01)；M組[分別為(0.29±0.02)、(0.28±0.01)]、W組[分別為(0.36±0.12)、(0.39±0.02)]和C組[分別為(0.38±0.02)、(0.40±0.02)]均顯著低于A組(均P＜0.01)。
　　 7．RT-PCR檢測(cè)肺組織Gale

11、ctin-8mRNA、ERK1mRNA、ERK2mRNA表達(dá)：三者表達(dá)呈明顯一致性，A組高于同時(shí)期N組：[分別為(0.915±0.039)、(0.889±0.030)和(0.951±0.010)、(0.482±0.008)、(0.327±0.021)和(0.348±0.012)](均P＜0.01):M組[分別為(0.582±0.037)、(0.439±0.007)、(0.424±0.022)]、W組[分別為(0.705±0.030)、(

12、0.567±0.021)、(0.519±0.010)]和C組[分別為(0.756±0.010)、(0.608±0.037)、(0.557±0.020)]均顯著低于A組(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 8．相關(guān)分析：(1)大鼠肺組織中Galectin-8mRNA含量與ERK1mRNA含量、ERK2mRNA含量、血清和BALF中ICAM-1濃度、BALF中細(xì)胞總數(shù)、氣道管壁厚度及平滑肌厚度呈正相關(guān)；(2)肺組織中Galecti

13、n-8表達(dá)與P-ERK1/2的表達(dá)、BALF中ICAM-1濃度、BALF中細(xì)胞總數(shù)、氣管壁厚度及平滑肌厚度呈正相關(guān)。
　　 結(jié)論：1．Galectin-8參與哮喘氣道炎癥損傷和哮喘氣道重塑過(guò)程，與哮喘的發(fā)生有著十分密切的關(guān)系，其作用機(jī)理可能與通過(guò)和細(xì)胞表面的整合素結(jié)合介導(dǎo)下游的ERK1/2磷酸化有關(guān)。
　　 2．姜黃素改善哮喘大鼠氣道炎癥、減輕氣道壁和氣道平滑肌增殖程度，其作用與抑制Galectin-8有關(guān)。