地龍在哮喘氣道重塑中的抑制作用.pdf

1、目的：支氣管上皮細胞通過分泌許多細胞因子及趨化因子，在哮喘氣道慢性炎癥和氣道重塑中發(fā)揮重要作用。氣道慢性炎癥和氣道重塑是哮喘顯著性特征。目前哮喘的主要治療藥物為糖皮質(zhì)激素和β2-受體激動劑等，但長期應用副作用大、敏感性下降，因此探索能夠有效調(diào)節(jié)關鍵性細胞因子的活性，使細胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)沉積與降解趨于平衡的藥物己經(jīng)成為抗氣道重塑研究的方向之一。地龍是有確切療效的抗哮喘藥物，其廣泛的藥理作用與哮喘

2、氣道重塑密切相關，本實驗觀察地龍對屋塵螨(Dermatophagoides pteronyssinus，Derpl)抗原致敏人永生化支氣管上皮細胞系BEP2D(Human epithelial cells，HBE)及人胚肺成纖維細胞(Human embryonic lung fibroblast，HLF)影響，探討地龍在支氣管哮喘治療中的價值及可能的作用機理，為臨床治療提供新的思路。 方法：給予人永生化支氣管上皮細胞系BEP2D

3、(HBE)以不同的干預和治療，分為：單純培養(yǎng)組即對照組(A組)，Derpl抗原(10μg/ml)組(B組)，Derpl抗原(10 μg/ml)+地塞米松(Dexamethasone，DEX)(1X10-6mol/l)組(C組)，Derpl抗原(10μg/ml)+地龍注射液(0.9mg/m1)組(D組)，Derpl抗原(10μg/ml)+地龍注射液(9mg/ml)組(E組)，Derpl抗原(10μg/ml)+地龍注射液(18mg/ml)組

4、(F組)，培養(yǎng)72小時，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)實驗檢測各組細胞白細胞介素(IL)-13(Interleukin-13，IL-13)mRNA，轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1(Transforming growth factor-β1，TGF-β1)mRNA，Smad2 mRNA表達；并收集以上各組上清液，作用于人胚肺成纖維細胞(HLF)72小時，免疫細胞化學法檢測平滑肌肌動蛋白(SMA)-α(Smooth muscle ac

5、tin-α，α-SMA)，纖維粘連蛋(Fibronectin，F(xiàn)N)表達。數(shù)據(jù)分析采用SPSS13.0軟件，計量數(shù)據(jù)以±s表示，多組間比較用方差分析檢驗，多組間的兩兩比較用q檢驗，兩數(shù)據(jù)的相關性比較用Spearman等級相關分析。 結(jié)果： 1．Derpl對HBE細胞的形態(tài)學的影響：倒置相差顯微鏡下觀察，正常組為未加Derpl抗原，表現(xiàn)為單層細胞完全平鋪，HBE細胞在正常生長狀態(tài)下以圓形或類圓形細胞占主要份額(如圖1A箭頭

6、所示)，梭形細胞比例較少，體積較大，排列緊密；加入Derpl抗原(10μg/ml)組培養(yǎng)72h后，表現(xiàn)為細胞瘦長(如圖1B箭頭所示)，細胞間隙增大(如1三角符號所示)，即出現(xiàn)小孔。 2．IL-13，TGF-β1，Smad2等細胞因子基因水平表達各組間差異有統(tǒng)計學意義(p<0.01)，B組IL-13 mRNA，TGF-β1mRNA，Smad2 mRNA表達高于A組，且差異有顯著性p<0.05)，地龍各劑量組(D、E、F組)及C組I

7、L-13 mRNA，TGF-β1mRNA，Smad2mRNA與A組存在一定差異，但差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)；地龍各劑量組(D、E、F組)及C組IL-13 mRNA，TGF-β1mRNA，Smad2mRNA表達受到抑制，與B組比較差異有顯著性(p<0.05)，D、E、F組與C組比較，差異無統(tǒng)計學意義。D、E、F組間雖有一定差異，但差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)，即不存在明顯的量效關系。 3．α-SMA，F(xiàn)N蛋白表達A、B

8、、C、D、E、F組上清液對應HLF組分別為A1、B1、C1、D1、E1、F1組。B1組α-SMA，F(xiàn)N表達高于A1組，且差異有統(tǒng)計學意義(p<0.01)，E1、F1組及C1組α-SMA，F(xiàn)N表達與A1組存在一定差異，但差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)；D1、E1、F1組及C1組α-SMA，F(xiàn)N表達受到抑制，與B1組比較差異有顯著性(p<0.01)，D1、E1、F1組與C1組比較差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。 4．各檢測指標相

9、關性分析TGFβ1mRNA與Smad2 mRNA呈正相關(rs=0.9429,p<0.05)。TGFβ1mRNA與FN蛋白表達呈正相關(rs=0.9429,p<0.05)。 結(jié)論： 1．屋塵螨抗原可引起人支氣管上皮細胞哮喘樣改變，表現(xiàn)為IL-13，TGF-β1，Smad2等細胞因子表達增加。 2．人支氣管上皮細胞在誘導氣道重塑中起重要作用，表現(xiàn)為屋塵螨抗原致敏人支氣管上皮細胞后收集上清液，作用于成纖維細胞，可引起