支氣管上皮細(xì)胞在哮喘氣道重建中的作用.pdf

1、目的：通過采用Western-blot法和RT-PCR法分別檢測(cè)永生化人支氣管上皮細(xì)胞(BEP2D)在不同濃度屋塵螨抗原Derp的作用下TGF-β1、Smad2、IL-13和TGF-β1mRNA、Smad2 mRNA、IL-13mRNA的表達(dá)變化，并采用細(xì)胞免疫化學(xué)技術(shù)檢測(cè)人胚肺成纖維細(xì)胞(HLF)在不同濃度屋塵螨抗原DerP作用下的纖連蛋白(FN)和平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)的表達(dá)變化，探討支氣管上皮細(xì)胞在哮喘氣道重建中的作用。

2、 方法： (1)培養(yǎng)永生化人支氣管上皮細(xì)胞(BEP2D)，根據(jù)加入屋塵螨抗原濃度的不同分為四組：空白對(duì)照組、0.2ug/mL Der Pl組、2.0ug/mL Der pl組和10.0ug/mL Der pl組，每組均按照不同的作用時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng)：24h、48h和72h，然后收集細(xì)胞，采用Western blot法和RT-PCR法測(cè)定BEP2D在不同濃度Der Pl、不同作用時(shí)間下的TGF-β1、Smad2、IL-13和TGF

3、-β1mRNA、Smad2 mRNA、IL-13mRNA的表達(dá)水平變化。 (2)培養(yǎng)人胚肺成纖維細(xì)胞(HLF)，按照屋塵螨抗原Derp濃度的不同分為四組：空白對(duì)照組、0.2ug/mL Der pl組、2.0ug/mL Der pl組、10.0ug/mL Der pl組和LHC-8*組(LHC-8，為支氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)液，是加入10.0ug/mL Der pl后培養(yǎng)BEP2D 72h后收集的)，每組均按照不同的作用時(shí)間24h、48

4、h和72h進(jìn)行培養(yǎng)，然后采用細(xì)胞免疫化學(xué)的方法，觀察纖連蛋白(FN)和平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)的表達(dá)水平變化。 (3)統(tǒng)計(jì)處理用SPSSl0.0統(tǒng)計(jì)軟件，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，樣本間均數(shù)的比較采用t檢驗(yàn)，變量間的關(guān)系采用Pearson直線相關(guān)分析，P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 屋塵螨抗原不能直接作用于成纖維細(xì)胞使其表達(dá)發(fā)生改變，但可通過作用于支氣管上皮細(xì)胞，激發(fā)其合成釋放的TGF-