Galectin-3在哮喘小鼠氣道炎癥中的作用及低分子柑桔果膠的干預(yù).pdf

1、目的： (1)觀察哮喘小鼠半乳糖凝集素3(Galectin-3)及其mRNA、NF-κB在氣道、肺組織中的表達(dá)情況。 (2)通過(guò)觀察Galectin-3在哮喘小鼠氣道、肺組織中表達(dá)的變化及其與NF-κB蛋白活化的相關(guān)性，初步探討Galectin-3在哮喘中的作用及其參與哮喘發(fā)生發(fā)展過(guò)程的可能機(jī)制。 (3)研究低分子柑桔果膠(MCP)、地塞米松對(duì)哮喘小鼠Galectin-3及Th1/Th2平衡的影響及其機(jī)制。

2、 方法：建立小鼠卵清白蛋白(OVA)致敏和激發(fā)的哮喘模型。50只SPF級(jí)雄性BALB/c小鼠(3-5周)隨機(jī)分為五組，每組10只：A組(正常對(duì)照組)，B組(哮喘模型組)，C組(低分子柑桔果膠預(yù)防組)，D組(低分子柑桔果膠治療組)，E組(地塞米松治療組)。正常組用生理鹽水，模型組及各干預(yù)組用OVA/Al(OH)3混合凝膠于第8、21天腹腔注射(i.p)致敏，第32天開(kāi)始激發(fā)，每日一次，每次30分鐘，連續(xù)7天。C組每日上午8時(shí)30分給予灌

3、胃低分子柑桔果膠(MCP)2400mg/kg，1次/天；D組激發(fā)前每日上午8時(shí)30分給予灌胃低分子柑桔果膠(MCP)2400mg/kg，1次/天；激發(fā)前1小時(shí)，E組予地塞米松(0.5mg/kg)干預(yù)，其余兩組以生理鹽水代替。末次激發(fā)后24小時(shí)內(nèi)處死小鼠用固相夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測(cè)血清及BALF液中IL-4、IFN-γ水平，對(duì)支氣管肺泡灌洗液(BALF)行細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)，BALF沉渣涂片作細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)，光鏡、電鏡觀察肺組

4、織病理變化，免疫組化、RT-PCR法測(cè)Galectin-3、NF-κB的表達(dá)情況等。 結(jié)果： 1.細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(lèi)計(jì)數(shù)：B組BALF細(xì)胞總數(shù)[(100.28±2.24)×107/L]、嗜酸細(xì)胞百分比[(11.33±0.72)％]均顯著高A組[分別為(22.40±1.09)x107/L、(0.61±0.03)％](均P＜0.01)；C組[分別為(58.40±4.43)×107/L、(6.31±0.32)％]、D組[分別為(9

5、1.43±5.48)×107/L、(8.85±1.39)％]、E組[分別為(37.73±2.67)×107/L、(2.51±0.32)％]，均低于B組仍高于A組(P＜0.05或P＜0.01)。 2.肺組織病理改變：B組肺組織切片HE染色可見(jiàn)支氣管和血管周?chē)仔约?xì)胞浸潤(rùn)(主要為Eos、Lym、Neu)，支氣管上皮多處斷裂，并有基底膜增厚和平滑肌肥大等表現(xiàn)；PAS染色可見(jiàn)氣道上皮杯狀細(xì)胞增生肥大，大量黏液形成，并可見(jiàn)氣管腔內(nèi)黏液栓。

6、C組、D組、E組上述改變程度不一，均比B組輕，其中以E組最為輕微。 3.肺組織超微結(jié)構(gòu)：電鏡下A組顯示正常的肺泡隔和肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞，支氣管纖毛上皮排列整齊；B組顯示肺泡隔明顯增厚，炎癥細(xì)胞增多，基底膜增厚，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞腫脹，出現(xiàn)板層小體及線粒體空泡現(xiàn)象，支氣管上皮細(xì)胞纖毛排列稀疏。 4.BALF中IFN-γ濃度：B組BALF中IFN-γ的濃度[(6.20±4.38)pg/ml]顯著低于A組[(18.85±7.32)

7、pg/ml](P＜0.01)；C組[(9.42±4.69)Pg/ml]、D組[(7.24±3.21)pg/ml]、E組[(8.65±3.39)pg/ml]與A組比較均明顯降低(P＜0.01)，其中C組、D組和E組與B組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。 5.血清、BALF中IL-4濃度：B組血清IL-4濃度[(14.43±1.49)pg/ml]及BALF液IL-4濃度[(148.87±30.90)pg/ml]均高于A組[分別為(

8、5.50±0.56)pg/ml、(37.14±3.70)pg/ml](P＜0.01)，C組分別為[(10.33±0.90)pg/ml、(75.54±10.03)pg/ml]、D組分別為[(12.03±2.75)pg/ml、(98.40±28.80)pg/ml]和E組分別為[(9.32±0.71)pg/ml、(72.42±7.96)pg/ml]均顯著低于B組(P＜0.05或P＜0.01)。 6.免疫組化檢測(cè)Galectin-3表達(dá)

9、結(jié)果：Galectin-3主要表達(dá)于支氣管上皮細(xì)胞及散在的炎性細(xì)胞。B組小鼠肺組織Galectin-3表達(dá)(0.32±0.01)明顯高于A組(0.18±0.03)(P＜0.01)，C組(0.25±0.01)、D組(0.29±0.01)和E組(0.22±0.02)均顯著低于B組(P＜0.05或P＜0.01)。 7.RT-PCR檢測(cè)Galectin-3mRNA表達(dá)的結(jié)果：肺組織Galectin-3mRNA的表達(dá)，B組(0.39±0.

10、01)顯著高于A組(0.20±0.07)，C組(0.34±0.01)、D組(0.34±0.03)和E組(0.29±0.01)均顯著低于B組(P＜0.05或P＜0.01)。 8.免疫組化檢測(cè)NF-κB表達(dá)結(jié)果：NF-κB主要表達(dá)于支氣管上皮細(xì)胞胞漿及核內(nèi)，以胞核陽(yáng)性染色細(xì)胞作為為NF-κB免疫陽(yáng)性蛋白。B組小鼠肺組織NF-κB的活化(0.34±0.03)明顯多于A組(0.17±0.03)(P＜0.01)，C組(0.24±0.04)

11、、D組(0.28±0.05)和E組(0.21±0.01)均較B組明顯減少(P＜0.01)，但仍多于A組(P＜0.05或P＜0.01)。 9.相關(guān)分析：(1)小鼠肺組織中Galectin-3mRNA表達(dá)與血清和BALF中IL-4濃度、BALF中細(xì)胞總數(shù)成正相關(guān)，與BALF中IFN-γ濃度成負(fù)相關(guān)；(2)肺組織中Galectin-3表達(dá)與BALF中IL-4濃度及氣道上皮NF-κB活化成正相關(guān)；(3)肺組織中NF-κB的表達(dá)與血清中I

12、L-4濃度、肺組織中Galectin-3mRNA含量成正相關(guān)。 結(jié)論： 1.哮喘小鼠氣道、肺組織Galectin-3及其mRNA表達(dá)增多，其與炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)、IL-4濃度及NF-κB蛋白活化呈正相關(guān)關(guān)系。 2.小鼠補(bǔ)充低分子柑桔果膠后下調(diào)Galectin-3mRNA的表達(dá)，下調(diào)IL-4水平，上升IFN-γ水平，減少EOS浸潤(rùn)和杯狀細(xì)胞化生。 3.地塞米松干預(yù)后哮喘小鼠氣道、肺組織Galectin-3表達(dá)顯著