PI3K-Akt途徑在哮喘大鼠氣道炎癥中的作用及羅紅霉素的調(diào)控.pdf

1、目的：研究P13K/Akt(phosphoinositide3-kinaseandAkt)信號途徑與大鼠支氣管哮喘(簡稱哮喘)模型氣道炎癥的關(guān)系，進(jìn)一步探討p-Akt(磷酸化Akt，Akt的活化形式)蛋白表達(dá)量對Th1/Th2平衡的影響；研究羅紅霉素、地塞米松對P13K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及哮喘氣道炎癥的影響。 方法：以卵白蛋白(OVA)致敏和激發(fā)建立大鼠哮喘模型。SPF級，雄性SD大鼠40只，用隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為5組，每組8只

2、：正常對照組(C)、哮喘組(A)、地塞米松(DXM)組(D)、羅紅霉素組(R)、渥曼寧青霉素(Wortmannin)組(W)。正常組以生理鹽水代替OVA進(jìn)行致敏和激發(fā)。各組大鼠于末次激發(fā)后24小時(shí)，放血處死；留取支氣管肺泡灌洗液(BALF)及肺組織。光鏡觀察肺組織病理變化；BALF沉渣涂片進(jìn)行細(xì)胞分類計(jì)數(shù)；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測定BALF中IL-4，IL-13，IL-12的濃度；免疫組化MaxvisionTM法測定肺組織中p-

3、Akt蛋白的表達(dá)量并觀察其表達(dá)位置；Westernblot測定肺組織勻漿中p-Akt蛋白的含量。 結(jié)果： (1)光鏡觀察：大鼠肺組織切片HE染色，正常對照組支氣管及血管周圍未見炎性細(xì)胞浸潤，支氣管完整，管腔未見粘液栓；哮喘組均可見支氣管及血管周圍的炎癥細(xì)胞浸潤，以淋巴細(xì)胞(Lym)、嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)和中性粒細(xì)胞(Neu)為主，支氣管上皮多處斷裂，管腔內(nèi)大量粘液；地塞米松組、羅紅霉素組、渥曼寧青霉素組上述改變程度不一

4、，均較哮喘組輕。 (2)BALF中炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)：BALF中EOS占細(xì)胞總數(shù)的百分比(EOS％)哮喘組(7.26±1.24)％高于對照組(0.81±0.32)％(P＜0.01)；地塞米松組、羅紅霉素組和渥曼寧青霉素組分別為(2.80±0.53)％、(4.10±0.71)％和(3.49±0.93)％，均低于哮喘組(P＜0.01)。 (3)BALF中IL-4、IL-13、IL-12含量：ELISA法檢測BALF中IL-4含量，

5、哮喘組(216.63±50.59pg/ml)、地塞米松組(93.81±11.77pg/ml)、羅紅霉素組(76.34±28.65pg/ml)、渥曼寧青霉素組(117.75±68.49)均高于對照組(29.54±14.63pg/ml)(P＜0.01)，地塞米松組、羅紅霉素組、渥曼寧青霉素組均低于哮喘組(P＜0.01)；ELISA法檢測BALF中IL-13含量，哮喘組(160.61±49.11pg/ml)、地塞米松組(61.73±17.48

6、pg/ml)、羅紅霉素組(55.29±13.76pg/ml)、渥曼寧青霉素組(81.68±14.50pg/ml)均高于對照組(31.49±4.05pg/ml)(P＜0.01或P＜0.05)，地塞米松組、羅紅霉素組、渥曼寧青霉素組均低于哮喘組，(P＜0.01或P＜0.05)；ELISA法檢測BALF中IL-12含量，哮喘組(15.22±4.85pg/ml)，地塞米松組(23.96±5.09pg/ml)，羅紅霉素組(21.58±4.23pg

7、/ml)，渥曼寧青霉素組(21.46±3.95pg/ml)低于對照組(42.22±6.19pg/ml)(P＜0.01)，哮喘組低于羅紅霉素組、地塞米松組、渥曼寧青霉素組(P＜0.01或P＜0.05)。 (4)各組大鼠p-Akt蛋白免疫組化結(jié)果比較：各組的平均光密度值(opticaldensity，OD值)哮喘組(0.194±0.021)、地塞米松組(0.088±0.010)、羅紅霉素組(0.095±0.011)、渥曼寧青霉素組(

8、0.080±0.007)均高于對照組(0.043±0.012)(P＜0.01)，地塞米松組、羅紅霉素組、渥曼寧青霉素組P-Akt蛋白活化量明顯低于哮喘組(P＜0.01)，各藥物干預(yù)組間以渥曼寧青霉素組濃度最低，但各組間無顯著性差異(P＞0.05)。 (5)WesternBlot測得各組大鼠肺組織的p-Akt光密度值：哮喘組(0.939±0.029)、地塞米松組(0.647±0.075)、羅紅霉素組(0.639±0.023)、渥曼

9、寧青霉素組(0.611±0.049)均高于對照組(0.273±0.050)(P＜0.01)，地塞米松組、羅紅霉素組、渥曼寧青霉素組p-Akt蛋白活化量明顯低于哮喘組（P＜0.01)，各藥物干預(yù)組間以渥曼寧青霉素組最低，但各組間無顯著性差異(P＞0.05)。 (6)相關(guān)分析：(1)肺組織勻漿中p-Akt蛋白含量與BALF中IL-4濃度呈呈顯著正相關(guān)(r=0.871，P＜0.01，n=30)；(2)肺組織勻漿中p-Akt蛋白含量與B

10、ALF中IL-13濃度呈顯著正相關(guān)(r=0.787，P＜0.01，n=30)；(3)肺組織勻漿中p-Akt蛋白含量與BALF中IL-12濃度呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.856，P＜0.01，n=30)； 結(jié)論： (1)哮喘大鼠模型中出現(xiàn)了P13K-Akt通路的激活，其Th1/Th2失衡可能與P13K/Akt通路的激活有關(guān)。 (2)羅紅霉素、糖皮質(zhì)激素可能通過抑制P13K/Akt通路，影響Th1/Th2平衡，減輕哮喘氣