Galectin-3在子宮內(nèi)膜容受性建立中的作用研究.pdf

1、胚泡著床是一個復(fù)雜的過程，包括胚泡定位、黏附、入侵并最終植入子宮內(nèi)膜。著床成功的必要條件是胚泡的成熟和子宮內(nèi)膜容受性的建立。子宮內(nèi)膜容受性是指子宮內(nèi)膜接受胚泡著床的能力，人類子宮內(nèi)膜容受性建立時期為月經(jīng)周期第20-24天，此時子宮內(nèi)膜具有接受胚胎著床的能力，被稱為胚胎著床的“窗口期”。已有資料表明，許多分子參與調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜容受性的建立，但詳細(xì)的分子機(jī)制至今仍不清楚，這對提高助孕技術(shù)水平和調(diào)節(jié)生育方法的發(fā)展是極大的障礙。Galectin-

2、3(gal-3)是課題組應(yīng)用抑制性差減雜交技術(shù)(SSH)篩選出的子宮內(nèi)膜容受性相關(guān)基因，進(jìn)一步研究證實gal-3 mRNA在分泌中期子宮內(nèi)膜的表達(dá)高于其它期；gal-3蛋白表達(dá)在分泌中期子宮內(nèi)膜達(dá)最高峰。提示gal-3可能在子宮內(nèi)膜容受性建立過程中發(fā)揮重要的作用。gal-3參與調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜容受性的機(jī)理需進(jìn)一步研究。本課題通過研究雌、孕激素對gal-3的調(diào)節(jié)、應(yīng)用RNA干擾技術(shù)研究gal-3表達(dá)抑制后子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞增殖和黏附的變化、ga

3、l-3表達(dá)抑制后相關(guān)配體表達(dá)的變化、整聯(lián)蛋白和細(xì)胞外基質(zhì)(FN)的共表達(dá)等，探討gal-3在子宮內(nèi)膜容受性建立中的作用和可能機(jī)制。本研究有助于更好的理解胚胎植入子宮內(nèi)膜容受性建立、子宮內(nèi)膜獲得黏附特性的機(jī)制。 第一部分雌孕激素對子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞表達(dá)galectin-3的影響 目的：體外研究雌激素、孕激素對子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞gal-3表達(dá)的調(diào)節(jié)，探討gal-3在子宮內(nèi)膜時序性表達(dá)的可能調(diào)節(jié)機(jī)制。 方法：體外培養(yǎng)RL9

4、5-2細(xì)胞，加入不同濃度雌二醇(E2)和安宮黃體酮(MPA)培養(yǎng)，設(shè)空白對照，培養(yǎng)24h后收集細(xì)胞，分別提取RNA、蛋白質(zhì)進(jìn)行半定量RT-PCR和Western Blot分析。 結(jié)論：雌、孕激素可以上調(diào)子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞gal-3的表達(dá)，且其調(diào)節(jié)在一定濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性。說明gal-3在子宮內(nèi)膜周期性表達(dá)與雌、孕激素的周期性調(diào)節(jié)有關(guān)。 第二部分Galectin-3對子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞生長和黏附的影響 目的：通過研

5、究gal-3對子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞生長周期和黏附特性的調(diào)節(jié)，探討gal-3與子宮內(nèi)膜容受性建立的關(guān)系。 方法：RL95-2單層細(xì)胞體外培養(yǎng)，應(yīng)用RNA干擾技術(shù)(siRNA)抑制gal-3表達(dá)，Rr-PCR法和Western Blot分析gal-3mRNA和蛋白表達(dá)抑制率。流式細(xì)胞Galectin-3在子宮內(nèi)膜容受性建立中的作用研究技術(shù)觀察細(xì)胞生長周期，黏附實驗測定細(xì)胞黏附率的變化。 結(jié)論：Gal-3可以影響子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的

6、增殖和黏附，它可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、黏附等過程參與子宮內(nèi)膜容受性的形成。 第三部分Galectin-3對子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)和功能的影響 目的：通過研究gal-3對RL95-2細(xì)胞整聯(lián)蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)、研究gal-3對子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞和滋養(yǎng)細(xì)胞黏附界面黏附分子表達(dá)和共定位的調(diào)節(jié)，探討gal-3參與調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜容受性的可能機(jī)制。 方法：應(yīng)用RNA干擾技術(shù)(siRNA)抑制RL95-2細(xì)胞gal-3表達(dá)，流式細(xì)

7、胞技術(shù)觀察RL95-2細(xì)胞表面整聯(lián)蛋白β1、β3的表達(dá)。RL95-2-Bewo球體共培養(yǎng)體系模擬體外胚胎植入模型。設(shè)RL95-2 siRNA轉(zhuǎn)染組和陰性對照組，加入Bewo細(xì)胞球共培養(yǎng)，免疫熒光/激光共聚焦法觀察模擬母胎界面整聯(lián)蛋白β1、β3與FN的表達(dá)和共定位，并應(yīng)用Leica microsystems software進(jìn)行熒光強(qiáng)度分析。 結(jié)論： Gal-3可能通過調(diào)節(jié)母胎界面的整聯(lián)蛋白的表達(dá)及整聯(lián)蛋白與ECM的結(jié)合調(diào)節(jié)細(xì)胞黏