宮腔粘連子宮內(nèi)膜中整合素αⅤβ3和LIF的表達及麒麟丸改善宮腔粘連子宮內(nèi)膜容受性的動物研究.pdf

1、目的：采用免疫組織化學法（ IHC）及半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法（RT-PCR），通過對比宮腔粘連組患者與正常對照組患者種植窗期子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3（IntegrinαVβ3）和白血病抑制因子（LIF）蛋白及基因的表達情況，進而探討宮腔粘連患者子宮內(nèi)膜容受性的改變，明確整合素αVβ3及LIF能否作為判定改善IUA患者子宮內(nèi)膜容受性的評價指標。通過研究麒麟丸對宮腔粘連SD大鼠孕早期子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3（Integrinα

2、Vβ3）及白血病抑制因子（LIF）蛋白及基因表達的影響，探討麒麟丸改善宮腔粘連大鼠子宮內(nèi)膜組織容受性的可能機制，以期為臨床上治療 IUA所致子宮內(nèi)膜容受性下降引起生育障礙性疾病等棘手問題提供新思路、新方法。
　　方法：1.臨床實驗：選取已確診為宮腔粘連并在我院行宮腔鏡下宮腔粘連分離術(shù)的15例患者為研究組，因子宮縱隔、子宮內(nèi)膜息肉等疾病需行宮腔鏡手術(shù)治療的15例患者為對照組。各組術(shù)中收集適量子宮內(nèi)膜組織分為兩份，一份標本經(jīng)甲醛固定后

3、行免疫組織化學檢測法檢測整合素αVβ3及LIF的蛋白含量；另一份標本經(jīng)液氮充分研磨后提取組織RNA，行實時熒光定量測定整合素αVβ3及LIF mRNA的表達，并進行統(tǒng)計學分析。
　　2.動物實驗：選取健康成熟雌性SD大鼠36只，隨機分為模型中藥組12只，模型對照組12只，空白對照組12只，用陰道涂片的方式監(jiān)測各組大鼠動情周期，大鼠動情期利用苯酚膠漿法對模型中藥組、模型對照組大鼠建立宮腔粘連模型，空白對照組行假手術(shù)處理，造模術(shù)后第1

4、0天各組大鼠隨機處死2只，取造模側(cè)子宮組織行HE染色和Masson染色，以確定造模是否成功，造模成功次日開始對模型中藥組大鼠灌胃麒麟丸混懸液2ml，模型對照組及空白對照組分別灌胃生理鹽水2ml，各組均2次/日，各組大鼠于灌胃15天后按2：1雌雄合籠，使其自然受孕，各組大鼠于妊娠第5天斷頸處死，收集造模側(cè)子宮組織，取其中一段經(jīng)甲醛固定后行免疫組織化學法檢測整合素αVβ3、LIF的蛋白表達量，另一段縱向剖開刮取子宮內(nèi)膜組織經(jīng)液氮充分研磨后提

5、取組織RNA，行實時熒光定量測定整合素αVβ3及LIF mRNA的表達，并進行統(tǒng)計學分析。
　　結(jié)果：1.臨床實驗：臨床組織蛋白含量檢測結(jié)果：宮腔粘連組子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3及LIF的蛋白表達水平明顯低于正常對照組；臨床組織mRNA含量檢測結(jié)果：宮腔粘連組子宮內(nèi)膜組織中整合素αVβ3及 LIF的mRNA表達水平明顯低于正常對照組。差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　2.動物實驗：
　　A確定造模：造模術(shù)后第

6、10天，模型中藥組及模型對照組隨機處死的SD大鼠經(jīng)HE染色均可見宮腔部分甚至近乎完全堵塞，粘膜下腺體減少，纖維化增生明顯，排列紊亂；空白對照組隨機處死的SD大鼠經(jīng)HE染色可見宮腔形態(tài)規(guī)則，內(nèi)膜較厚，間質(zhì)內(nèi)可見豐富的腺體、血管和少量排列整齊的成纖維細胞。模型中藥組和模型對照組的SD大鼠經(jīng)Masson染色可見子宮粘膜下層膠原纖維明顯增多，排列紊亂且致密；空白對照組的SD大鼠經(jīng)Masson染色可見子宮粘膜下層有少量的膠原纖維，呈藍色梭形，排列

7、規(guī)則。
　　B整合素αVβ3、LIF的表達：模型中藥組、模型對照組子宮內(nèi)膜整合素αVβ3、LIF蛋白及mRNA表達均明顯低于空白對照組；模型中藥組子宮內(nèi)膜整合素αVβ3、LIF蛋白及mRNA表達明顯高于模型對照組，且差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：1.本實驗中宮腔粘連組患者子宮內(nèi)膜中整合素αVβ3、LIF蛋白及mRNA的表達均較正常對照組患者子宮內(nèi)膜低，提示宮腔粘連影響了子宮內(nèi)膜容受性的建立。2.模型對照組大