PDGF、TGF-β、TIMP-1在宮腔粘連患者子宮內(nèi)膜組織及血清中的表達和意義.pdf

1、宮腔粘連(intrauterine adhesions，IUA)是指因?qū)m腔手術(shù)操作、放射、感染、結(jié)核等原因造成子宮頸管和（或）子宮腔壁相互粘連，臨床可表現(xiàn)為周期性腹痛、月經(jīng)減少或閉經(jīng)、繼發(fā)不孕、妊娠異常（流產(chǎn)、早產(chǎn)、胎死宮中等）及胎盤異常（胎盤前置、胎盤粘連、胎盤植入等）。隨著人工流產(chǎn)及各種宮腔操作地逐漸頻繁，近年來IUA呈逐年上升的趨勢，據(jù)報道大約1.7％的繼發(fā)性閉經(jīng)和40％的不孕患者均有不同程度的宮腔粘連。但是，其病因和發(fā)病機制尚未

2、完全清楚，成為當(dāng)前婦產(chǎn)科領(lǐng)域研究的難點和熱點，因此國內(nèi)外學(xué)者對其進行了大量的臨床觀察與實驗研究，就病因和發(fā)病機制提出了以下幾種學(xué)說：1）創(chuàng)傷；2）感染；3）神經(jīng)反射學(xué)說；4）纖維細胞增生活躍學(xué)說；5）低雌激素狀態(tài)。
　　 近年來，以纖維細胞增生活躍學(xué)說最受關(guān)注，成為研究的熱點和難點。血小板源性生長因子(platelet-derived growth factors，PDGF)是調(diào)控胚胎生長發(fā)育、分化、細胞生長以及其他包括惡性腫瘤

3、在內(nèi)的許多疾病的關(guān)鍵細胞因子，據(jù)報道，PDGF與多種器官纖維化的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切；轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor beta, TGF-β)是強大的細胞增殖調(diào)節(jié)劑，在纖維化過程中促進細胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的合成并抑制其降解，在各個環(huán)節(jié)起作用，刺激各種ECM的合成和沉積，使基質(zhì)蛋白受體的數(shù)量增多的同時減少基質(zhì)降解酶以及增加降解酶抑制劑的合成，從而促進纖維化的發(fā)生

4、?；|(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-l，TIMP-1)是一組基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)的主要抑制劑，幾乎不可逆地抑制MMPs的活性，阻止ECM的降解，從而促使ECM在細胞外堆積，促使纖維化的形成。
　　 目的：
　　 本研究采用免疫組織化學(xué)S-P法及酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked imm

5、unosorbent assay, ELISA)法分別檢測宮腔粘連患者和非宮腔粘連患者子宮內(nèi)膜組織中及血清中PDGF、TGF-β、TIMP-1的表達，探討PDGF、TGF-β、TIMP-1在宮腔粘連發(fā)生發(fā)展中所起的作用，為宮腔粘連的治療和預(yù)防提供理論依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 1研究對象
　　 選擇2009年9月至2009年12月期間因IUA在鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院住院行宮腔鏡下宮腔粘連分離術(shù)(transce

6、rvical resection of adhesions，TCRA)的患者60例作為研究組，其中輕-中度粘連組30例，年齡(29.57±3.53)歲，重度粘連組30例，年齡(29.82±3.85)歲，主訴為閉經(jīng)10例，月經(jīng)減少33例，繼發(fā)不孕17例；對照組選擇同期因子宮縱隔在鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院住院行宮腔鏡下子宮縱隔電切術(shù)(transcervical resection of septum，TCRS)的患者30例，年齡(28.77±4

7、.60)歲。
　　 納入標(biāo)準：宮腔粘連組：官腔鏡檢查確診為IUA患者，且按照March分類法分為輕-中度粘連組、重度粘連組；子宮縱隔組；宮腔鏡檢查確診為子宮縱隔患者。
　　 排除標(biāo)準：年齡＞40歲；體質(zhì)量＞100kg;術(shù)前6個月內(nèi)服過激素類藥物或放置宮內(nèi)節(jié)育器；官腔鏡檢查證實有其它子宮內(nèi)疾病（如肌瘤、息肉）；有嚴重的其它系統(tǒng)疾?。δ苷系K、免疫系統(tǒng)疾病、嚴重心血管及肝、腎疾病、腫瘤）；處在急性炎癥反應(yīng)階段；或有嚴重過

8、敏史及過敏體質(zhì)。所有研究對象均簽署了知情同意書。
　　 2標(biāo)本采集
　　 2.1子宮內(nèi)膜組織：分別取IUA患者及對照組子宮內(nèi)膜組織，子宮內(nèi)膜組織先放入10％的甲醛溶液中固定24h，之后石蠟包埋，每份標(biāo)本行HE染色后，光鏡下觀察組織學(xué)形態(tài)，篩選組織標(biāo)本。
　　 2.2于無菌操作下分別采集IUA患者及對照組空腹外周靜脈血3mL，離心后取上清液，分組編號后，置-80℃冰箱凍存待成批測定。
　　 3實驗方法

9、>　　 3.1子宮內(nèi)膜組織采用免疫組織化學(xué)S-P法，嚴格按照試劑盒說明書方法染色，在顯微鏡下仔細觀察，子宮內(nèi)膜組織細胞胞漿或者胞膜出現(xiàn)黃色-棕黃色-棕褐色顆粒沉著為陽性細胞，PDGF、TGF-β、和TIMP-1主要定位于胞漿。全面觀察每張切片，隨機選取5個具有代表意義的高倍視野(×400)，分別測定陽性區(qū)百分比、積分光密度(OD)、陽性區(qū)積分光密度，以陽性區(qū)平均積分光密度值(IOD)作為本例切片的測定值。
　　 3.2血清采用

10、ELISA法，嚴格按照試劑盒說明書操作，應(yīng)用酶標(biāo)儀在450nm處讀出各空的吸光度值（OD值），繪制標(biāo)準曲線，得出3組血清中PDGF、TGF-β、和TIMP-1的濃度。
　　 4統(tǒng)計學(xué)處理
　　 應(yīng)用SPSS17.0軟件包進行統(tǒng)計分析，各組計量資料均以(-x)±s表示。多組計量資料比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗，各個指標(biāo)之間的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析法。檢驗水準α=0.05。
　　

11、 結(jié)果：
　　 1 PDGF在子宮內(nèi)膜組織及血清中的表達
　　 PDGF在3組子宮內(nèi)膜組織中均可見表達，主要集中在子宮內(nèi)膜腺上皮細胞的胞漿中，觀察組子宮內(nèi)膜組織中PDGF的表達高于對照組，其中重度粘連組子宮內(nèi)膜組織中PDGF的表達高于輕-中度粘連組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；
　　 PDGF在3組血清中均被檢測到，觀察組血清中PDGF的表達高于對照組，其中重度粘連組血清中PDGF的表達高于輕-中度粘連組

12、，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2 TGF-β在子宮內(nèi)膜組織及血清中的表達
　　 TGF-β在3組子宮內(nèi)膜組織中均可見表達，主要集中在子宮內(nèi)膜腺上皮細胞的胞漿中，觀察組子宮內(nèi)膜組織中TGF-β的表達高于對照組，其中重度粘連組子宮內(nèi)膜組織中TGF-β的表達高于輕-中度粘連組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；
　　 TGF-β在3組血清中均被檢測到，觀察組血清中TGF-β的表達高于對照組，其中重度粘連組

13、血清中TGF-β的表達高于輕-中度粘連組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）
　　 3 TIMP-1在子宮內(nèi)膜組織及血清中的表達
　　 TIMP-1在3組子宮內(nèi)膜組織中均可見表達，主要集中在子宮內(nèi)膜腺上皮細胞的胞漿中，觀察組子宮內(nèi)膜組織中TIMP-1的表達高于對照組，其中重度粘連組子宮內(nèi)膜組織中TIMP-1的表達高于輕-中度粘連組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；
　　 TIMP-1在3組血清中均被檢測到，觀察組

14、血清中TIMP-1的表達高于對照組，其中重度粘連組血清中TIMP-1的表達高于輕-中度粘連組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 4 IUA患者子宮內(nèi)膜組織中PDGF、TGF-β、TIMP-1的相關(guān)性分析
　　 對觀察組子宮內(nèi)膜組織中PDGF與TIMP-1所表達的陽性區(qū)平均積分光密度值做相關(guān)性分析，結(jié)果提示：兩者之間呈正相關(guān)(r=0.661，P＜0.05)。對觀察組子宮內(nèi)膜組織中TGF-β與TIMP-1所表達的陽性

15、區(qū)平均積分光密度值做相關(guān)性分析，結(jié)果提示：兩者之間呈正相關(guān)(r=0.661，P＜0.05)。對觀察組子宮內(nèi)膜組織中TGF-β與TIMP-1所表達的陽性區(qū)平均積分光密度值做相關(guān)性分析，結(jié)果提示：PDGF與TGF-β的表達呈相關(guān)(r=0.630，P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1 PDGF、TGF-β、TIMP-1可能在IUA的發(fā)病機制中起著重要作用；
　　 2 IUA患者子宮內(nèi)膜組織及血清中PDGF、TGF-