ALCAM在子宮內(nèi)膜惡性轉(zhuǎn)化中的作用.pdf

1、本文對ALCAM在子宮內(nèi)膜惡性轉(zhuǎn)化中的作用進(jìn)行了研究。本研究分為兩個部分：
　　 第一部分：ALCAM在正常、增生和惡性子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)。
　　 目的：子宮內(nèi)膜癌是女性生殖道常見的惡性腫瘤之一，占女性生殖道惡性腫瘤的20％～30％。據(jù)子宮內(nèi)膜癌的病因、病理和生物學(xué)行為的不同，通常將子宮內(nèi)膜癌分為雌激素依賴型(Ⅰ型)和非雌激素依賴型(Ⅱ型)，其中以Ⅰ型(子宮內(nèi)膜樣腺癌，本文研究的子宮內(nèi)膜癌即為子宮內(nèi)膜樣腺癌)最為多見，

2、約占子宮內(nèi)膜癌的80％左右。子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)病可能與無孕激素拮抗的雌激素持續(xù)刺激有關(guān)，但具體發(fā)病機(jī)制仍不清楚。ALCAM屬于免疫球蛋白超家族黏附分子，為Ⅰ型跨膜蛋白。ALCAM可以通過嗜異種黏附形式(ALCAM-CD6)和嗜同種黏附形式(ALCAM-ALCAM)介導(dǎo)細(xì)胞間黏附。在多種生理及病理過程中起作用。研究表明，ALCAM與多種惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)，說明ALCAM表達(dá)的改變可能影響腫瘤細(xì)胞的黏附能力，進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞侵襲過程。本

3、實(shí)驗(yàn)通過檢測ALCAM在正常子宮內(nèi)膜、增生性子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)狀態(tài)，分析ALCAM的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系，探討ALCAM在子宮內(nèi)膜惡性轉(zhuǎn)化及肌層浸潤機(jī)制中的作用。
　　 方法：收集20例正常增殖期子宮內(nèi)膜、20例正常分泌期子宮內(nèi)膜、15例單純性增生內(nèi)膜、12例復(fù)雜性增生內(nèi)膜、14例不典型增生內(nèi)膜和42例子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本。分別采用免疫組織化學(xué)染色法和western blot法檢測各組組織中ALCAM的

4、蛋白表達(dá)水平，用RT-PCR法檢測ALCAM的mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：⑴ALCAM的陽性免疫組化染色定位于子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞的胞膜及胞漿，間質(zhì)無表達(dá)。從正常增殖期及分泌期內(nèi)膜、單純性增生及復(fù)雜性增生內(nèi)膜、到不典型增生內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌組織，胞膜的ALCAM染色的強(qiáng)度逐漸增加。且在不典型增生內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌組織中，胞膜ALCAM的染色強(qiáng)度顯著高于正常增殖期內(nèi)膜、正常分泌期內(nèi)膜、單純性增生內(nèi)膜和復(fù)雜性增生內(nèi)膜。在正常增殖期內(nèi)膜

5、及正常分泌期內(nèi)膜，胞漿內(nèi)幾乎無ALCAM表達(dá)，ALCAM的胞漿染色從單純性增生內(nèi)膜開始出現(xiàn)，也呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢。且在不典型增生內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌組織中，ALCAM的染色強(qiáng)度顯著高于正常增殖期內(nèi)膜、正常分泌期內(nèi)膜、單純性增生內(nèi)膜和復(fù)雜性增生內(nèi)膜。在子宮內(nèi)膜癌組織中，ALCAM的胞膜及胞漿出現(xiàn)并非均勻性染色。其中，23例(54.8％)組織中ALCAM為均勻性強(qiáng)染，8例(19％)組織以膜強(qiáng)染為主胞漿呈現(xiàn)中度染色，11例(26.2％)組織以胞漿

6、強(qiáng)染為主，胞膜呈現(xiàn)強(qiáng)弱不等的不均一性染色，在部分區(qū)域膜染色消失。⑵western blot檢測正常增殖期及分泌期內(nèi)膜、單純性及復(fù)雜性增生內(nèi)膜、不典型增生內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌組織中ALCAM的蛋白表達(dá)，ALCAM的蛋白相對表達(dá)量分別為0.17±0.08、0.29±0.11、0.32±0.14、0.38±0.14、0.57±0.21和0.74±0.27，不典型增生內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌組織中的ALCAM蛋白表達(dá)顯著高于正常子宮內(nèi)膜和良性增生子宮內(nèi)膜(

7、P<0.05)。⑶在粘膜內(nèi)癌、肌層浸潤不超過1/2和肌層浸潤超過1/2的子宮內(nèi)膜癌組織中，AL，CAM的蛋白相對表達(dá)量分別為0.53±0.19、0.74±0.18、0.81±0.24，有肌層浸潤的子宮內(nèi)膜癌組織中ALCAM的蛋白表達(dá)顯著高于粘膜內(nèi)癌者(P<0.05)。但肌層浸潤不超過1/2和肌層浸潤超過1/2的ALCAM蛋白表達(dá)水平無顯著差異。在G1、G2和G3級的子宮內(nèi)膜癌組織中，ALCAM的蛋白相對表達(dá)量分別為0.62±0.19、0

8、.73±0.21、0.92±0.24，低分化組織內(nèi)ALCAM的蛋白表達(dá)顯著高于高、中分化者(P<0.05)。在Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ期子宮內(nèi)膜癌中，ALCAM的蛋白相對表達(dá)量分別為0.66±0.17、0.75±0.23、0.81±0.24，各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。⑷RT-PCR檢測正常增殖期及分泌期內(nèi)膜、單純性及復(fù)雜性增生內(nèi)膜、不典型增生內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌組織中ALCAM的mRNA表達(dá)，ALCAM的mRNA相對表達(dá)量分別為0.24±0.04、0.33

9、±0.08、0.38±0.15、0.43±0.15、0.64±0.18和0.78±0.25，ALCAM在子宮內(nèi)膜癌和不典型增生內(nèi)膜組織中mRNA的表達(dá)顯著高于正常內(nèi)膜、單純性增生內(nèi)膜和復(fù)雜性增生內(nèi)膜(P<0.05)。
　　 結(jié)論：ALCAM在不典型增生內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)顯著增高，ALCAM在子宮內(nèi)膜的惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮作用。伴有肌層浸潤的子宮內(nèi)膜癌組織中ALCAM表達(dá)顯著高于粘膜內(nèi)癌，提示ALCAM可能在子宮內(nèi)膜癌浸潤中發(fā)揮

10、作用。
　　 第二部分：孕激素對不同子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系A(chǔ)LCAM表達(dá)的影響。
　　 目的：子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病可能與無孕激素拮抗的雌激素持續(xù)刺激相關(guān)。孕激素治療子宮內(nèi)膜癌可使子宮內(nèi)膜癌的腺體向良性逆轉(zhuǎn)，其治療子宮內(nèi)膜癌的具體分子機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過檢測子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Ishikawa及KLE中ALCAM的表達(dá)狀態(tài)，及孕激素處理前后ALCAM表達(dá)的變化。分析ALCAM表達(dá)狀態(tài)與孕激素關(guān)系，探討子宮內(nèi)膜癌治療中孕激素拮抗的可能

11、機(jī)制。
　　 方法：分別用濃度分別為10mg/l、15mg/l、20mg/l、25mg/l、30mg/l的醋酸甲地孕酮(MA)刺激培養(yǎng)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞24、36、48小時，MTT法檢測細(xì)胞生長的抑制率，選擇最佳半抑制濃度。細(xì)胞組織化學(xué)染色觀察MA處理后Ishikawa及KLE細(xì)胞中ALCAM蛋白表達(dá)變化，western blot半定量分析MA處理后ALCAM的蛋白表達(dá)變化，RT-PCR測定MA處理后ALCAM mRNA的表達(dá)變化。

12、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測孕激素處理后細(xì)胞遷移率的變化。未用藥物處理組做對照組。
　　 結(jié)果：⑴MA能抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Ishikawa的生長，濃度為20mg/l作用48小時時Ishikawa細(xì)胞生長抑制率達(dá)50％。MA對KLE細(xì)胞的生長無明顯的抑制作用。⑵細(xì)胞組織化學(xué)染色顯示，Ishikawa及KLE細(xì)胞的ALCAM染色均位于胞漿，胞膜無染色。在Ishikawa細(xì)胞，ALCAM呈中度染色。KLE細(xì)胞染色較Ishikawa細(xì)胞染色強(qiáng)。M

13、A處理后Ishikawa細(xì)胞ALCAM染色強(qiáng)度減弱，而KLE細(xì)胞的染色強(qiáng)度無顯著變化。⑶Ishikawa細(xì)胞對照組與MA處理組的ALCAM蛋白相對表達(dá)量分別為1.13±0.23和0.64±0.18；ALCAM mRNA相對表達(dá)量分別為0.88±0.27與0.33±0.17。KLE細(xì)胞對照組與MA處理組的ALCAM蛋白相對表達(dá)量分別為1.33±0.37和1.27±0.25；ALCAM mRNA相對表達(dá)量分別為1.14±0.36和0.93±