甲磺司特對哮喘大鼠氣道炎癥及IL-5的影響.pdf

1、目的
　　在大鼠哮喘模型上觀察甲磺司特（Suplatast Tosilate，IPD）干預(yù)前后哮喘大鼠氣道炎癥、肺組織白細(xì)胞介素5（Interleukin-5，IL-5）基因表達(dá)以及肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluids，BALF)中IL-5的含量的變化，探討甲磺司特在哮喘防治中的可能作用機(jī)制。
　　方法
　　1.取雄性成年SD大鼠（4周齡，體重200±20g）50只，分為五組：對照（C

2、ontrol）組、模型（Model）組、布地奈德（budesonide，BUD）組、IPD早期干預(yù)組即IPD(A)組和IPD晚期干預(yù)組即IPD(B)組，各組10只。
　　2.在實(shí)驗(yàn)0天(即致敏前)尾靜脈采血測定外周血嗜酸性粒細(xì)胞（eosinophil,，EOS）總數(shù)與百分比。除Control組以外的其余四組大鼠分別于第1天和第8天腹腔注射10﹪OVA混合液1ml（含OVA100mg、氫氧化鋁100mg及滅活百日咳桿菌苗5×109個(gè)

3、作為免疫佐劑）致敏。2周后再進(jìn)行激發(fā)，2﹪OVA泵霧化吸入，10分鐘/次，每天1次，連續(xù)7天，構(gòu)建大鼠哮喘模型，Control組致敏和激發(fā)均以生理鹽水代替。BUD組每次激發(fā)前BUD泵霧化吸入，IPD(A)組和IPD(B)組分別從致敏和激發(fā)階段開始予IPD（50mg/kg.d）灌胃。
　　3.末次激發(fā)24小時(shí)內(nèi)麻醉動(dòng)物，再次尾靜脈采血測定外周血EOS總數(shù)與百分比，氣管插管后行氣道高反應(yīng)性（airway hyper responsiv

4、eness，AHR）檢測；檢測后立即腹主動(dòng)脈放血處死大鼠，取各組動(dòng)物BALF及肺組織，分別測定BALF中炎性細(xì)胞總數(shù)和EOS百分比、通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）檢測肺組織 IL-5mRNA的表達(dá)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（Enzyme linked immunosorbent assay， ELISA）測定BALF上清液中IL-5的含量

5、，并分析IL-5與EOS、AHR之間的相關(guān)性，結(jié)合肺組織病理學(xué)檢查分析氣道炎癥狀態(tài)。
　　結(jié)果
　　1.大鼠哮喘模型的建立：與Control組相比，在激發(fā)過程中，Model組大鼠逐漸出現(xiàn)煩躁不安、撓鼻、呼吸急促、點(diǎn)頭狀呼吸、發(fā)紺、活動(dòng)進(jìn)食減少或俯臥不動(dòng)、出現(xiàn)豎毛、毛發(fā)失去光澤甚至脫毛、反應(yīng)遲滯等哮喘樣表現(xiàn)。激發(fā)7天后，Model組大鼠動(dòng)物氣道高反應(yīng)性測定顯示氣道反應(yīng)性增高，與Control組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05

6、）；肺組織病理顯示：氣道周圍明顯炎癥改變、支氣管管壁增厚、管腔狹窄,氣道上皮細(xì)胞脫落，粘液分泌明顯增加。BALF細(xì)胞學(xué)顯示EOS百分比明顯增加(P＜0.05)，提示哮喘大鼠模型復(fù)制成功。
　　2.氣道高反應(yīng)性測定：各組大鼠用鹽酸組胺激發(fā)，在同一激發(fā)濃度，Model組、BUD組、IPD(A)組和IPD(B)組氣道阻力明顯高于Control組(P＜0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與Model組相比，BUD組、IPD(A)組和IPD(B)

7、組氣道阻力明顯降低（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而IPD(A)組與BUD組之間相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3.病理組織學(xué)檢查：Model組氣道周圍炎癥改變明顯、支氣管管壁增厚、管腔狹窄，氣道上皮細(xì)胞脫落，粘液分泌明顯增加。與Model組比較，IPD(A)組、IPD(B)和BUD組氣道周圍炎癥明顯減輕，氣道周圍炎癥細(xì)胞浸潤、氣道分泌物減少、支氣管壁增厚及上皮細(xì)胞脫落現(xiàn)象明顯改善。
　　4. BALF細(xì)胞學(xué)

8、檢測：IPD(A)組、IPD(B)組和BUD組炎性細(xì)胞總數(shù)及EOS百分比明顯低于Model組(P＜0.05)；IPD(A)組與BUD組之間炎性細(xì)胞總數(shù)及EOS百分比則差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　5.外周血EOS總數(shù)與百分比：實(shí)驗(yàn)前（即致敏前）：5組大鼠外周血EOS的總數(shù)與百分比無明顯差異（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)后（即激發(fā)7天后）：IPD(A)組、IPD(B)組和BUD組外周血EOS總數(shù)與百分比明顯低于Model組(P＜0

9、.05)；IPD(A)組、IPD(B)組和BUD組外周血EOS總數(shù)與百分比三組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　6. BALF上清液中IL-5含量：致敏、激發(fā)后Model組BALF上清液中IL-5的含量較Control組明顯升高(P＜0.05)；IPD(A)組、IPD(B)組和BUD組IL-5含量明顯低于Model組(P＜0.05）；IPD(A)組和BUD組之間相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　7.肺組織

10、IL-5mRNA表達(dá)量：致敏、激發(fā)后Model組肺組織中IL-5mRNA的表達(dá)較Control組明顯升高(P＜0.05)；IPD(A)組、IPD(B組)和BUD組IL-5mRNA表達(dá)量明顯低于Model組(P＜0.05)， IPD(A)組和BUD組之間相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　8. BALF中IL-5含量與氣道阻力成正相關(guān)（r＝0.919，P＜0.01）；肺組織IL-5mRNA的表達(dá)量與氣道阻力成正相關(guān)（r＝0.

11、909，P＜0.01）；BALF中IL-5含量與EOS百分比成正相關(guān)（r＝0.955，P＜0.01）；BALF中EOS百分比與氣道阻力成正相關(guān)（r＝0.865，P＜0.01）；BALF中IL-5含量與BALF中炎性細(xì)胞總數(shù)成正相關(guān)（r＝0.955， P＜0.01）；肺組織IL-5mRNA的表達(dá)量與BALF中IL-5的含量成正相關(guān)（r＝0.973， P＜0.01）。
　　結(jié)論
　　1. IPD能夠降低哮喘大鼠氣道高反應(yīng)性，部分