熱休克蛋白27在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞遷移和侵襲中的作用研究.pdf

1、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌是威脅人類健康的主要腫瘤之一，已成為全球第六大好發(fā)性腫瘤，每年約有逾50萬(wàn)病例發(fā)生，且惡性程度高，已成為第五大致死腫瘤1。每年的死亡數(shù)約為14，000例，約占全部腫瘤診斷病例的6％2。根據(jù)American Cancer Society數(shù)據(jù)顯示，盡管隨著外科技術(shù)水平的提高和放療化療方案的成熟，在1996-2003年間，其死亡率已顯著降低，但是，其復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移病例的術(shù)后存活時(shí)間僅為6個(gè)月。而這其中，導(dǎo)致低存活率的主要因素就是區(qū)

2、域性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或者遠(yuǎn)處臟器轉(zhuǎn)移。因此針對(duì)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因研究成為腫瘤研究的熱點(diǎn)之一。
　　 熱休克蛋白27(heat shock protein，Hsp27)是小分子量熱休克蛋白家族中最具代表性的成員，其重要的生物學(xué)功能是保護(hù)細(xì)胞免受環(huán)境中自由基、熱、缺血和毒性物質(zhì)等各種應(yīng)激因素導(dǎo)致的損傷，促進(jìn)蛋白質(zhì)的正確折疊、組裝和糾正蛋白質(zhì)的錯(cuò)誤結(jié)構(gòu)。此外，Hsp27也參與微絲的穩(wěn)定，細(xì)胞增殖、分化、及細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)等5-7。

3、
　　 有報(bào)道顯示Hsp27與多種腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移有關(guān)，其作為一種應(yīng)激蛋白，在腫瘤中的表達(dá)程度與腫瘤分期及預(yù)后有一定的相關(guān)性。但有研究發(fā)現(xiàn)Hsp27在某些腫瘤中過(guò)表達(dá)；而同時(shí)在某些腫瘤中低表達(dá)或無(wú)表達(dá)8，9。如在前列腺癌10，人肝細(xì)胞肝癌11，12，腎細(xì)胞癌13，口腔舌鱗癌14及乳腺癌15，胃癌16，17中，Hsp27均呈高表達(dá)狀態(tài)，并被認(rèn)為是預(yù)后不良的標(biāo)志性因子。同時(shí)有諸多研究的結(jié)果與以上研究截然相反，顯示Hsp27是預(yù)后良好

4、的標(biāo)志性因子，在諸多患有惡性纖維素瘤15，成神經(jīng)細(xì)胞瘤18，子宮內(nèi)膜腺瘤19，20和食道癌的患者中，都有報(bào)道認(rèn)為Hsp27高水平表達(dá)預(yù)示預(yù)后良好。也有更多的研究支持，即使對(duì)同一病理分型的腫瘤進(jìn)行有關(guān)Hsp27的研究，其與腫瘤惡性性及轉(zhuǎn)移和侵襲的關(guān)系也不完全一致；此外，不同組織來(lái)源的腫瘤，不同個(gè)體間，也存在同樣現(xiàn)象。因此，目前，對(duì)于Hsp27的研究，尤其Hsp27與頭頸部鱗狀細(xì)胞癌的關(guān)系尚無(wú)定論。
　　 本課題中使用美國(guó)密歇根大學(xué)

5、腫瘤中心Thomas E.Carey實(shí)驗(yàn)室建立并保存的來(lái)自同一病人原發(fā)腫瘤和同期存在的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的兩種細(xì)胞系UM-SCC-22A/UM-SCC-22B，首先分別運(yùn)用MTS，細(xì)胞劃痕試驗(yàn)，Matrigel細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)及裸鼠活體內(nèi)生物發(fā)光技術(shù)，觀察此兩種細(xì)胞系生物學(xué)行為的異同，發(fā)現(xiàn)相對(duì)于低轉(zhuǎn)移潛能頭頸鱗癌細(xì)胞系UM-SCC-22A，高轉(zhuǎn)移潛能頭頸鱗癌細(xì)胞系UM-SCC-22B表現(xiàn)出極強(qiáng)的遷移和侵襲特性。即，來(lái)源于同一病患同期原位癌和淋巴結(jié)

6、轉(zhuǎn)移灶的兩種細(xì)胞系，在體內(nèi)外轉(zhuǎn)移生物學(xué)行為上存在著顯著差異，可被用于進(jìn)行頭頸鱗癌轉(zhuǎn)移行為的研究模型。而且，在此模型中我們發(fā)現(xiàn)其兩者的Hsp27mRNA和蛋白水平表達(dá)存在顯著性差異，即，UM-SCC-22A低表達(dá)Hsp27，同時(shí)，UM-SCC-22B高表達(dá)Hsp27，因此，我們將此實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ陀糜谶M(jìn)行Hsp27在頭頸鱗癌遷移和侵襲中的作用研究，以期能夠揭示兩者之間的關(guān)系。
　　 作為一種新的基因治療方法，RNA干擾(RNA inter

7、ference，RNAi)以其特異性、高效性成為研究的熱點(diǎn)。慢病毒載體具有可感染分裂細(xì)胞及非分裂細(xì)胞、轉(zhuǎn)移基因片段容量較大、目的基因表達(dá)時(shí)間長(zhǎng)、不易誘發(fā)宿主免疫反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)，已成為當(dāng)前基因治療中的理想載體?；铙w內(nèi)熒光示蹤系統(tǒng)的應(yīng)用也拓展了腫瘤轉(zhuǎn)移動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕⑺悸?，尤其通過(guò)裸鼠左心房?jī)?nèi)注射腫瘤細(xì)胞所建立的腫瘤轉(zhuǎn)移動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，相?duì)于鼠尾注射，皮下注射、原位注射等操作，具有成瘤率高、成瘤速度快、動(dòng)物存活率高并且可以更好的模擬腫瘤細(xì)胞定植

8、、侵襲、轉(zhuǎn)移過(guò)程等優(yōu)點(diǎn)，已逐漸發(fā)展成為成熟且被廣泛應(yīng)用的腫瘤轉(zhuǎn)移動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br>　　 在本課題中，我們利用RNAi干擾技術(shù)，設(shè)計(jì)并合成針對(duì)頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞Hsp27基因的小干擾RNA片段，通過(guò)陽(yáng)離子脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Hsp27過(guò)表達(dá)腫瘤細(xì)胞，同時(shí)，購(gòu)買已建立的載有特異性抑制Hsp27基因表達(dá)的小發(fā)夾RNA的慢病毒質(zhì)粒，包裝生產(chǎn)慢病毒顆粒，長(zhǎng)效轉(zhuǎn)染Hsp27過(guò)表達(dá)腫瘤細(xì)胞；此外，設(shè)計(jì)構(gòu)建生產(chǎn)過(guò)表達(dá)Hsp27基因的慢病毒顆粒，長(zhǎng)效轉(zhuǎn)

9、染Hsp27低表達(dá)腫瘤細(xì)胞。運(yùn)用MTS，細(xì)胞劃痕，Matrigel細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)等觀察體外實(shí)驗(yàn)中腫瘤細(xì)胞相應(yīng)的遷移和侵襲能力改變，并同時(shí)通過(guò)建立裸鼠活體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移生物發(fā)光模型，觀察Hsp27基因沉默/過(guò)表達(dá)后，腫瘤細(xì)胞體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力的改變。以期進(jìn)一步研究頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移機(jī)制，及其與Hsp27表達(dá)之間的關(guān)系，探討抑制頭頸部鱗狀細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移的策略，同時(shí)探索頭頸部鱗狀細(xì)胞癌基因治療的靶點(diǎn)。
　　 本課題包括四部分
　　 第一

10、部分：不同轉(zhuǎn)移潛能頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株(UM-SCC-22A/UM-SCC-22B)生物學(xué)行為異同及Hsp27mRNA和蛋白的表達(dá)
　　 1.不同轉(zhuǎn)移潛能頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株生物學(xué)行為異同
　　 對(duì)2種已知轉(zhuǎn)移潛能的頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系UM-SCC-22A/UM-SCC-22B進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，采用MTS細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及transwell侵襲實(shí)驗(yàn)，建立裸鼠活體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移生物發(fā)光模型，觀察不同轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞系的

11、轉(zhuǎn)移能力。結(jié)果顯示：常規(guī)接種細(xì)胞培養(yǎng)24、48小時(shí)后，此兩種細(xì)胞系增殖能力無(wú)明顯差異(P>0.05)。細(xì)胞劃痕試驗(yàn)表明，劃痕產(chǎn)生48小時(shí)后，UM-SCC-22B細(xì)胞系劃痕愈合率達(dá)66.50％，UM-SC-22A僅為18.69％，即UM-SCC-22B細(xì)胞體外遷移能力為UM-SCC-22A的3.56倍。Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)顯示，接種105細(xì)胞于上室40小時(shí)后，UM-SCC-22B細(xì)胞系有53.56個(gè)細(xì)胞/觀察視野穿透Matrigel，

12、粘附于上室底膜下表面，UM-SCC-22A細(xì)胞系有25.45個(gè)細(xì)胞/觀察視野，即UM-SCC-22B細(xì)胞體外侵襲能力為UM-SCC-22A的2.11倍。生物發(fā)光顯示，UM-SCC-22B組細(xì)胞裸鼠左心房接種后，成瘤率和轉(zhuǎn)移率明顯高于UM-SCC-22A組。
　　 2.不同轉(zhuǎn)移潛能頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株中Hsp27mRNA和蛋白的表達(dá)
　　 對(duì)通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，具有不同轉(zhuǎn)移潛能的頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系UM-SCC-22A

13、/UM-SCC-22B進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blotting方法對(duì)Hsp27基因在mRNA和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，分析其表達(dá)豐度與頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移潛能的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，2種頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系均有Hsp27基因表達(dá)，高轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞系UM-SCC-22B中Hsp27表達(dá)水平明顯高于UM-SCC-22A，差異顯著(P<0.01)。UM-SCC-22B細(xì)胞系Hsp27 mRNA水平是UM-SCC-

14、22A的22.38倍，western blotting結(jié)果顯示UM-SCC-22B細(xì)胞中，位于27kb位置條帶明顯強(qiáng)于UM-SCC-22A。頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系Hsp27表達(dá)豐度與其轉(zhuǎn)移能力相關(guān)，隨著轉(zhuǎn)移能力的上升，Hsp27表達(dá)水平升高。
　　 第二部分：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染siRNA干擾Hsp27基因效果鑒定及其對(duì)UM-SCC-22B遷移和侵襲的影響
　　 1.siRNA干擾：Hsp27基因及其干擾效果鑒定
　　 根據(jù)

15、siRNA設(shè)計(jì)原則，設(shè)計(jì)合成靶向Hsp27基因的siRNA，采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑瞬時(shí)轉(zhuǎn)染高轉(zhuǎn)移潛能頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系UM-SCC-22B，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western Blotting檢測(cè)RNA干擾后Hsp27基因的沉默效果。結(jié)果顯示，siRNA Hsp27瞬時(shí)轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，Hsp27 mRNA水平明顯下調(diào)，其干擾效率為93％，與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組比較，差異具有顯著性(P<0.01)。siRNA Hsp27瞬時(shí)轉(zhuǎn)染4

16、8小時(shí)后，Hsp27蛋白水平明顯下調(diào)，western blotting結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組比較，位于27kb位置條帶明顯強(qiáng)度明顯下降，與實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果一致。
　　 2.siRNA干擾Hsp27基因?qū)︻^頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲的影響
　　 于轉(zhuǎn)染siRNA后48小時(shí)，應(yīng)用細(xì)胞劃痕試驗(yàn)檢測(cè)Hsp27基因表達(dá)下調(diào)后，高轉(zhuǎn)移潛能頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞UM-SCC-22B遷移能力變化；應(yīng)用Matrigel侵

17、襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Hsp27基因表達(dá)下調(diào)后，UM-SCC-22B侵襲能力的改變。轉(zhuǎn)染siRNA下調(diào)UM-SCC-22B細(xì)胞Hsp27基因表達(dá)后，細(xì)胞劃痕后24小時(shí)，空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組細(xì)胞劃痕開(kāi)始愈合，而siRNA轉(zhuǎn)染組幾乎沒(méi)有愈合；72小時(shí)后空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組愈合率達(dá)71.66％，50.57％，而siRNA轉(zhuǎn)染組僅有少量愈合，愈合率為18.30％，與其它兩組比較差異顯著(P<0.01)。Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，接種上室40小時(shí)

18、后，siRNA轉(zhuǎn)染組穿膜細(xì)胞數(shù)明顯減少，每個(gè)觀察視野僅有26.91個(gè)細(xì)胞，是空白對(duì)照組穿膜細(xì)胞數(shù)的50.24％，此結(jié)果與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比，具有顯著性差異(P<0.01)。
　　 第三部分：Hsp27基因shRNA慢病毒靶向沉默Hsp27的效果鑒定及對(duì)UM-SCC-22B生物學(xué)行為的影響
　　 1.Hsp27基因shRNA慢病毒載體的鑒定及其靶向沉默熱休克蛋白27的效果鑒定
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19、ystem，可表達(dá)shRNA Hsp27的慢病毒載體質(zhì)粒pLK0.1-shRNA-Hsp27質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染入U(xiǎn)M-SCC-22B細(xì)胞，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Hsp27表達(dá)，初步鑒定質(zhì)粒正確性和有效性。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染24，48小時(shí)后，Hsp27 mRNA表達(dá)量分別降至42％，24％，干擾效果明顯。密歇根大學(xué)載體中心包裝后，得到高滴度慢病毒顆粒pLenti-shRNA-Hsp27，長(zhǎng)效轉(zhuǎn)染入U(xiǎn)M-SCC-22B后，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和w

20、estern blotting檢測(cè)Hsp27表達(dá)。結(jié)果顯示，shRNA Hsp27長(zhǎng)效轉(zhuǎn)染后，Hsp27 mRNA水平明顯下調(diào)，其干擾效率為94％，與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組比較，差異具有顯著性(P<0.01)。Hsp27蛋白水平明顯下調(diào)，western blotting結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組比較，位于27kb位置條帶明顯強(qiáng)度明顯下降，與實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果一致。
　　 2.Hsp27基因shRNA慢病毒轉(zhuǎn)染后對(duì)頭頸

21、部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
　　 慢病毒顆粒pLenti-shRNA-Hsp27長(zhǎng)效轉(zhuǎn)染UM-SCC-22B，并高效干擾Hsp27表達(dá)后，采用MTS細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)，建立裸鼠活體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移生物發(fā)光模型，觀察Hsp27表達(dá)抑制后，UM-SCC-22B轉(zhuǎn)移能力變化。結(jié)果顯示：常規(guī)接種細(xì)胞培養(yǎng)24、48小時(shí)后，與空白組和陰性對(duì)照組相比，shRNA Hsp27組增殖能力無(wú)明顯差異(P>0.05)

22、。細(xì)胞劃痕試驗(yàn)表明，劃痕產(chǎn)生72小時(shí)后，空白對(duì)照組細(xì)胞劃痕愈合率達(dá)71.4％，shRNA Hsp27實(shí)驗(yàn)組僅為16.3％，即shRNA Hsp27干擾后，空白組細(xì)胞遷移能力為實(shí)驗(yàn)組4.38倍。Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)顯示，接種105細(xì)胞于上室40小時(shí)后，shRNA Hsp27實(shí)驗(yàn)組有29.6個(gè)細(xì)胞/觀察視野穿透Matrigel，粘附于上室底膜下表面，空白對(duì)照組細(xì)胞有60個(gè)細(xì)胞/觀察視野，即空白組細(xì)胞體外侵襲能力為shRNA asp27組

23、的2.03倍。熒光示蹤顯示，各組細(xì)胞裸鼠左心房接種后，空白組動(dòng)物模型成瘤率和轉(zhuǎn)移率明顯高于實(shí)驗(yàn)組。
　　 第四部分：重組Hsp27表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建、鑒定及其對(duì)頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
　　 1.重組Hsp27表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建和鑒定
　　 設(shè)計(jì)引入BamHI，Xbal兩個(gè)酶切位點(diǎn)的人Hsp27基因引物，利用pOTB7-Hsp27全長(zhǎng)cDNA質(zhì)粒，PCR擴(kuò)增Hsp27基因，平端酶切，回收純化。利用

24、BamHI，Xbal酶切位點(diǎn)，T4連接酶連接Hsp27基因片段和pLentiLox RSV慢病毒載體。雙酶切電泳驗(yàn)證目的Hsp27基因片段連接正確，轉(zhuǎn)化感受態(tài)DH5-alpha大腸桿菌，小提后進(jìn)行重組質(zhì)?；驕y(cè)序。測(cè)序正確，成功構(gòu)建過(guò)表達(dá)Hsp27基因慢病毒載體pLenti-RSV-Hsp27。大提后送密歇根大學(xué)載體中心包裝生產(chǎn)過(guò)表達(dá)Hsp27慢病毒顆粒pLenti-RSV-Hsp27。長(zhǎng)效轉(zhuǎn)染入低轉(zhuǎn)移潛能頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系UM-S

25、CC-22A后，實(shí)時(shí)熒光定量PCR和westernblotting檢測(cè)Hsp27表達(dá)。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染后，Hsp27基因mRNA和蛋白水平均明顯升高。過(guò)表達(dá)組Hsp27 mRNA水平是對(duì)照組的15.07倍，western blotting結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)組27kb蛋白條帶強(qiáng)度顯著增高。
　　 2.過(guò)表達(dá)Hsp27對(duì)頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
　　 慢病毒顆粒plenti-RSV-Hsp27長(zhǎng)效轉(zhuǎn)染UM-SCC-2

26、2A，并高效表達(dá)Hsp27表達(dá)后，采用MTS細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)，建立裸鼠活體內(nèi)熒光示蹤腫瘤轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型，觀察Hsp27表達(dá)增加后，UM-SCC-22A轉(zhuǎn)移能力變化。結(jié)果顯示：常規(guī)接種細(xì)胞培養(yǎng)24、48小時(shí)后，與空白對(duì)照組相比，過(guò)表達(dá)Hsp27組增殖能力無(wú)明顯差異(P>0.05)。細(xì)胞劃痕試驗(yàn)表明，劃痕產(chǎn)生48小時(shí)后，空白對(duì)照組細(xì)胞劃痕愈合率為19.84％，過(guò)表達(dá)Hsp27實(shí)驗(yàn)組為51.33％，即Hsp2

27、7過(guò)表達(dá)后，細(xì)胞遷移能力為空白對(duì)照組2.56倍。Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)顯示，接種105細(xì)胞于上室40小時(shí)后，Hsp27過(guò)表達(dá)組有59.13個(gè)細(xì)胞/觀察視野穿透Matrigel，粘附于上室底膜下表面，空白對(duì)照組細(xì)胞有29.35個(gè)細(xì)胞/觀察視野，即過(guò)表達(dá)組細(xì)胞體外侵襲能力為空白對(duì)照組的2.01倍。熒光示蹤顯示，各組細(xì)胞裸鼠左心房接種后，過(guò)表達(dá)組動(dòng)物模型成瘤率和轉(zhuǎn)移率明顯高于對(duì)照組。
　　 結(jié)論：
　　 1.成功建立頭頸部鱗

28、狀細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停㈩^頸部鱗狀細(xì)胞癌裸鼠活體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移生物發(fā)光模型。
　　 2.頭頸部鱗狀細(xì)胞癌Hsp27的表達(dá)與其轉(zhuǎn)移潛能密切相關(guān)，隨其轉(zhuǎn)移潛能的升高，其表達(dá)豐度升高。頭頸部鱗狀細(xì)胞癌低轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞系UM-SCC-22A/高轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞系UM-SCC-22B，可作為良好的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，深入研究Hsp27表達(dá)調(diào)控與頭頸部鱗狀細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移間的關(guān)系。
　　 3.體外合成，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染siRNA干擾技術(shù)可高效下調(diào)高轉(zhuǎn)移潛能頭頸

29、部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系UM-SCC-22B asp27基因的表達(dá)。
　　 4.瞬時(shí)轉(zhuǎn)染siRNAHsp27，高轉(zhuǎn)移潛能頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系Hsp27基因下調(diào)后，顯著抑制其細(xì)胞遷移和侵襲能力。Hsp27基因可作為有效頭頸部鱗狀細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移的治療靶點(diǎn)。
　　 5.長(zhǎng)效轉(zhuǎn)染慢病毒顆粒pLenti-shRNA-Hsp27能夠高效、特異的沉默高轉(zhuǎn)移潛能頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系UM-SCC-22B的Hsp27基因表達(dá)。
　　 6.

30、長(zhǎng)效轉(zhuǎn)染慢病毒顆粒pLenti-shRNA-Hsp27可顯著抑制高轉(zhuǎn)移潛能頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系UM-SCC-22B的體內(nèi)外轉(zhuǎn)移能力。
　　 7.成功構(gòu)建過(guò)表達(dá)Hsp27基因慢病毒載體pLenti-RSV-Hsp27。長(zhǎng)效轉(zhuǎn)染慢病毒顆粒pLenti-RSV-Hsp27可高效、特異性增加低轉(zhuǎn)移潛能頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系UM-SCC-22A的Hsp27基因表達(dá)。
　　 8.長(zhǎng)效轉(zhuǎn)染慢病毒顆粒pLenti-RSV-Hsp27可