液相分離及聯用技術在藥物分析和化妝品中限用禁用物質分析中的應用研究.pdf

1、液相分離方法中最為成熟和有效的方法當屬高效液相色譜和毛細管電泳。高效液相色譜法（High Performance Liqui Chromatography,HPLC）作為一種發(fā)展較為成熟的分析技術,以其分離效率,穩(wěn)定性,重復性等特點在藥物分析包括化妝品中限用禁用藥物的分析方面發(fā)揮著重要的作用。而毛細管電泳（CapillaryElectrophoresis,CE）是近二十年來發(fā)展較快的分析分離技術之一,具有分離效率高、分析速度快、所需樣品

2、少等特點,應用范圍廣。在緒論中概述了兩種分析技術發(fā)展的歷史、現狀以及發(fā)展趨勢,對兩種分析技術的基本原理和特點進行了簡單介紹,并介紹了近年來兩種分析檢測技術在藥物分析、藥品質量控制、化妝品中限用禁用藥物安全性控制等方面的應用。
　　本論文采用高效液相色譜法（HPLC）-電化學檢測（ECD）聯用技術對藥物的雜質進行了分離測定,比較了HPLC-ECD和HPLC-UV的區(qū)別。分別采用快速液相色譜法（RRLC）-光電二極管陣列檢測器（DAD

3、）聯用技術,高效毛細管電泳（HPCE）-電化學檢測（ECD）聯用技術,高效液相色譜法（HPLC）-串聯質譜檢測（MS/MS）聯用技術測定了化妝品中的限用禁用藥物。
　　主要內容如下:
　　1.甲氨蝶呤注射液含量及有關物質的HPLC-ECD法分離測定研究以乙腈-0.2mol·L-1磷酸鹽緩沖液（pH6.0）（10∶90）為流動相,采用TSK-GELODS-100SP色譜柱（150mm×4.6mm,5μm）,流速為1.0mL·m

4、in-1,柱溫35℃時,在+0.8V電位處,以玻碳圓盤電極為工作電極,銀-氯化銀電極為參比電極,建立了以高效液相色譜電化學檢測對甲氨蝶呤及其有關物質進行分離分析的方法。甲氨蝶呤的線性范圍為9.1-91μg·mL-1,r=0.9999;平均回收率為100.4％,RSD為1.0%（n=9）。氨蝶呤、甲蝶呤和甲氨蝶呤的最低檢出量分別為3.3、11和8.6ng。電化學安培檢測與紫外檢測相比,具有較高的靈敏度,能有效地應用于甲氨蝶呤注射液中甲氨蝶

5、呤含量以及極微量有關物質的檢測。
　　2.替尼泊苷注射液含量及有關物質的HPLC-ECD法分離檢測研究建立以高效液相色譜電化學檢測對替尼泊苷及其有關物質進行分離分析的方法。以PhenomenexR LUNA Phenyl-Hexyl柱,以乙腈-水（38∶62）為流動相,流速為1.0mL.min-1,玻碳圓盤電極為工作電極,銀-氯化銀電極為參比電極,在+0.7V電位處,實現了替尼泊苷及其有關物質與注射液中各種賦形劑的分離分析。木酚素

6、、替尼泊苷、α-亞乙基木酚素P和苦亞乙基木酚素P分別在0.1-9.6μg.mL-1,0.1-9.0μg.mL-1,0.1-5.8μg.mL-1和0.1-7.2μg.mL-1濃度范圍內呈良好線性,檢測限（LOD,S/N=3）分別為0.2ng,1.1ng,1.0ng和0.7ng。電化學安培檢測與紫外檢測相比,具有較高的靈敏度和選擇性,能有效地應用于替尼泊苷注射液中有關物質的檢測和含量的測定。
　　3.恩他卡朋含量及有關物質的HPLC-

7、ECD法分離測定研究建立以高效液相色譜-電化學檢測對恩他卡朋及其有關物質（z-異構體和3,4-二羥基-5-硝基苯甲醛）進行分離分析的方法。采用苯基柱,以甲醇-磷酸鹽緩沖溶液（pH 2.1）（46∶54）為流動相,玻碳圓盤電極為工作電極,銀-氯化銀電極為參比電極,在+0.65V工作電位處,實現了恩他卡朋及其有關物質的分離分析。恩他卡朋在0.06～38.6μg mL-1、z-異構體在0.06～42.5μg mL-1、3,4-二羥基-5-硝基

8、苯甲醛在0.06～27.5μg mL-1濃度范圍內線性關系良好,檢測限分別為0.05、0.06和0.03ng。恩他卡朋的平均回收率為99.9%,RSD為1.5%。電化學安培檢測具有較高的靈敏度和選擇性,能有效地應用于恩他卡朋原料和片劑中有關物質的檢測和片劑含量的測定。
　　4.膠束毛細管電泳安培檢測法分離測定化妝品中限用禁用酚類化合物采用毛細管電泳-電化學檢測技術（CE-ECD）同時測定了化妝品中限用禁用酚類化合物。考察了工作電極

9、的氧化電位、運行緩沖液的酸度和濃度、分離電壓、進樣時間等因素對分離和檢測的影響。在優(yōu)化條件下,以直徑300μm的碳圓盤電極為工作電極,工作電位為+0.80 V（vs.SCE）,在40 mmol L-1pH9.0的H3BO3-Na2B4O7緩沖液(含10 mmol L-1 SDS)中,上述組分實現了較好分離。被測物濃度與峰電流在三個數量級范圍內呈良好線性關系,檢測限在4.09×10-8g.mL-1到4.50×10-7g.mL-1之間,該方

10、法簡單可靠,已成功應用于不同化妝品中限用禁用酚類化合物的測定,是一種有效的化妝品安全分析檢測方法。
　　5.RPLC-DAD法分離測定化妝品中抗生素建立了祛痘除螨類化妝品中8種抗生素及甲硝唑同時測定的快速高效液相色譜分析方法。以Agielent1200快速高效液相色譜,采用SB和XDB-C18（1.8μm,4.6mm i.d.×50 mm）色譜柱,0.1 mol L-1磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調節(jié)pH為2.5）-乙腈為流動相進行梯度

11、洗脫,在7分鐘內首次實現了8種抗生素及甲硝唑的同時分離測定,常規(guī)液相色譜分離至少需要30分鐘才能完成一次分析。在4～100μg.mL-1線性范圍內,9種物質的線性相關系數均＞0.9999,最低檢出限為0.25～1.4ng。在低中高三個添加水平,9種物質的平均回收率為92.2%～103.2%,相對標準偏差為0.04%～4.5%。并考察了不同狀態(tài)的化妝品樣品的提取方式。該法操作簡便、準確、快速,能夠檢測祛痘除螨類化妝品中8種抗生素以及甲硝唑

12、的含量。
　　6.HPLC-MS/MS測定化妝品中丙烯酰胺殘留單體采用高效液相色譜-串聯質譜,Atlantis C18色譜柱（2.1×150 mm,3μm）,以0.1%甲酸溶液-0.1%甲酸甲醇溶液（98∶2）為流動相A,0.1%甲酸甲醇溶液為流動相B進行梯度洗脫。添加同位素內標13C3-丙烯酰胺于樣品中,經0.1%甲酸溶液提取,石油醚液液萃取凈化,串聯質譜多反應監(jiān)測模式,以保留時間及質譜圖定性,以峰高或峰面積進行定量,測定化妝品